Examinar el comportamiento de quimioevitación en gusanos transgénicos mediante el ensayo de evitación osmótica

En los nematodos, las neuronas quimiosensoriales (ASH) pueden detectar cambios de osmolaridad en su entorno causados por repelentes químicos. En respuesta, estos gusanos se alejan de los repelentes, lo que lleva a un comportamiento de quimioevitación.

La agregación anormal de proteínas dentro de las neuronas ASH puede conducir a alteraciones en el comportamiento de quimioevitación.

Para examinar el comportamiento de evitación osmótica en gusanos, comience con larvas de nematodos transgénicos con agregados de proteínas en neuronas ASH. Trate los nematodos con compuestos bioactivos que reduzcan la agregación de proteínas y restauren el comportamiento de evitación en algunos gusanos.

Transfiera los gusanos tratados a una placa de medios preparada previamente y sin alimentos para mantenerlos en la etapa larvaria. La placa tiene glicerol, un químico de alta resistencia osmótica, presente en su centro, creando una barrera osmótica para dividir la placa en dos zonas, una zona normal y una zona de trampa.

Complemente la zona de trampa con anestesia para detener el movimiento de los gusanos que cruzan la barrera. Agregue una gota de butanediona en la zona de la trampa para atraer a todos los gusanos, haciendo que se muevan hacia ella.

Los gusanos con agregación de proteínas no pueden sentir el estrés osmótico, cruzan la línea de barrera y quedan anestesiados en la zona de la trampa. Los gusanos con un comportamiento de quimioevitación restaurado se alejan del glicerol y permanecen dentro de la zona normal.

El número de gusanos en la zona normal se correlaciona con la eficacia de los compuestos bioactivos para restaurar el comportamiento de quimioevitación.

Para el ensayo de evitación osmótica, divida una placa NGM sin alimentos en zonas normales y de trampa, creando una línea de glicerol de 8 molares en el medio. Luego, extienda una línea de azida de sodio de 200 milimolares a aproximadamente 1 centímetro de distancia de la línea de glicerol para paralizar los nematodos que cruzan a través de la barrera de glicerol hacia la zona de trampa.

Transfiera alrededor de 200 nematodos cada uno a la zona normal de tres placas replicadas para cada grupo. Luego, agregue una gota de butanodiona al 1% en la zona de la trampa para atraer a los nematodos. Cubra la tapa de la placa de Petri inmediatamente e incube a 23 grados centígrados durante 90 minutos.

Puntúe el número de nematodos en ambas zonas bajo un microscopio y calcule el índice de evitación.