Visualización de la activación de caspasas en macrófagos derivados de monocitos humanos
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 5:19 min. • July 8th, 2025
En las células inmunitarias, la caspasa-1, una caspasa inflamatoria, es un componente clave que responde al sistema inmunitario y que existe en forma inactiva. Estas formas inactivas consisten en un prodominio fusionado con un dominio catalítico y se activan a través de la dimerización inducida por proximidad.
Para visualizar la activación de las caspasas in vivo, comience con un cultivo de macrófagos derivados de monocitos humanos transfectados que expresan proteínas fluorescentes rojas y un par de proteínas reporteras de complementación fluorescentes. Las proteínas reporteras contienen un prodominio de caspasa-1 fusionado con fragmentos no fluorescentes de la proteína Venus, ya sea Venus-N o Venus-C.
Trate las células con un medio de imagen que contenga lipopolisacáridos, un estimulante inflamatorio derivado de bacterias, e ionóforos de potasio, nigericina.
Los lipopolisacáridos interactúan con los receptores de reconocimiento de patrones en el macrófago, iniciando el ensamblaje de un complejo inflamatorio.
Las moléculas de nigericina ingresan a la célula y se unen a los iones de potasio, lo que provoca su salida al medio extracelular y disminuye la concentración de iones de pota
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