Cuantificación de interferones bioactivos de tipo I mediante un ensayo reportero de fosfatasa alcalina embrionaria secretada

Para cuantificar los interferones bioactivos de tipo I, como el interferón alfa y el interferón beta, en una muestra de prueba, tome una placa de pocillos múltiples que contenga células indicadoras modificadas. Estas células expresan el gen indicador de la fosfatasa alcalina embrionaria secretada, SEAP, bajo el control del promotor inducible de interferón alfa y beta.

Agregue la muestra de prueba que contiene una concentración desconocida de interferón tipo I. Pipetee una variedad de concentraciones de interferón tipo I humano a otros pocillos, que actúan como controles estándar. Incubar.

El interferón tipo I en el pozo de prueba se une a un receptor específico de la superficie celular, activando las quinasas Janus. Estas proteínas quinasas fosforilan transductores de señales y activadores de proteínas de transcripción, STAT, que se dimerizan y forman un complejo con un factor regulador de interferón específico.

Al ingresar al núcleo, el complejo se une a una secuencia de ADN específica en el promotor inducible de interferón alfa y beta, activando la transcripción del gen SEAP y produciendo las enzimas SEAP, que se secretan en el medio.

Transfiera los medios que contienen SEAP a po