Generación de un modelo murino de malaria cerebral experimental utilizando esporozoítos derivados de mosquitos huéspedes

Comience con un tubo que contenga glándulas salivales de mosquitos hembra infectados con Plasmodium berghei , un parásito que causa la malaria.

Altera mecánicamente las glándulas, liberando los esporozoítos, una forma infecciosa del parásito en el medio.

Granular las fracciones de glándulas y los desechos. Recoja el sobrenadante que contiene esporozoíto e inyéctelo en la vena de la cola de un ratón restringido.

Los esporozoítos inyectados viajan a través del torrente sanguíneo y llegan al hígado, donde infectan a los hepatocitos y se multiplican, formando merozoítos, una forma invasiva del parásito.

Con el tiempo, los hepatocitos liberan merozoítos en el torrente sanguíneo, invadiendo los glóbulos rojos o glóbulos rojos.

Dentro de los glóbulos rojos, los merozoítos se replican asexualmente, se desarrollan en forma madura y expresan antígenos derivados del parásito en la superficie de los glóbulos rojos.

Estos antígenos se unen a los receptores endoteliales, incluidos los de los vasos sanguíneos cerebrales, lo que lleva al secuestro de glóbulos rojos infectados y no infectados.

Esta acumulación anormal de glóbulos rojos interrumpe la barrera hematoencefálica, causando acumulación de líquido en el parénquima del cerebro y desarrollando malaria cerebral en el ratón.

Comience recolectando mosquitos hembra de su jaula de 17 a 22 días después de la comida de sangre. Use fórceps para colocar de 3 a 4 mosquitos en un portaobjetos de vidrio cubierto con una gota de medio RPMI frío. Luego, coloque el portaobjetos bajo un microscopio.

Estire con cuidado el mosquito entre la cabeza y el cuerpo con fórceps, y use una jeringa y una aguja para aislar la glándula salival. A continuación, recoja las glándulas salivales del portaobjetos de vidrio succionándolas con una pipeta de vidrio y transfiriéndolas a un tubo centrífugo de 1,5 mililitros. Luego, use un pequeño palo de plástico para aplastar las glándulas salivales aisladas dentro del tubo de centrífuga durante tres minutos para aislar los esporozoítos del tejido de las glándulas salivales.

Centrifugar durante tres minutos a 1.000 veces g en 4 grados centígrados para purificar los esporozoítos del tejido restante. Pipetee el sobrenadante, que contiene los esporozoítos, a un nuevo tubo de centrífuga y cuente los esporozoítos purificados en un hemocitómetro Neubauer. Los esporozoítos muestran un movimiento típico en sentido contrario a las agujas del reloj.

A continuación, ajuste la concentración de los esporozoítos purificados a 10,000 por mililitro agregando solución salina tamponada con fosfato. Finalmente, coloque un ratón C57BL6 en un inmovilizador y coloque su cola en agua tibia para visualizar mejor la vena de la cola. Luego, inyecte un total de 1,000 esporozoítos, o 0.1 mililitros, en la vena de la cola para iniciar la infección.