Purificación de nanopartículas de proteínas autoensamblables mediante cromatografía de afinidad

Tome una suspensión de bacterias modificadas que expresan nanopartículas de proteínas autoensamblables recombinantes con etiquetas de polihistidina.

Sonicar para liberar componentes intracelulares.

Centrífuga para recoger el sobrenadante que contiene nanopartículas de proteínas. Dilúyalo con un tampón sin imidazol.

Tome una columna de cromatografía de afinidad que contenga perlas de agarosa con cationes de níquel inmovilizados.

Agregue un tampón con una baja concentración de imidazol para equilibrar la columna.

Agregue el lisado bacteriano a la columna.

Durante la ejecución, la polihistidina en las nanopartículas de proteínas se une fuertemente con cationes de níquel.

Mientras tanto, los contaminantes como los lipopolisacáridos bacterianos y otras proteínas se unen débilmente a la columna.

Lavar con un tampón que contenga una baja concentración de imidazol para eliminar las proteínas débilmente unidas.

Introducir isopropanol para eliminar los lipopolisacáridos y luego lavar.

A continuación, introduzca un tampón con una concentración intermedia de imidazol. El imidazol compite con la histidina por unirse al catión níquel, liberando nanopartículas de proteínas unidas.

A continuación,