Medición de la actividad neuronal en un trozo de cerebro de ratón después de una incubación prolongada
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:55 min. • July 8th, 2025
Asegure un corte de cerebro de ratón en una cámara de registro, perfundido con aCSF oxigenado después de una incubación prolongada.
Las células de la rebanada están cargadas con un indicador de calcio, lo que facilita las mediciones de calcio intracelular.
Tome una pipeta de registro que comprende un electrodo en una solución de electrolitos.
Identificar una neurona objetivo. Coloque la pipeta de registro con presión positiva sobre la membrana celular, creando un hoyuelo.
Aplique presión negativa para crear un sello hermético.
Además, aplique pulsos de presión negativa, rompiendo la membrana y estableciendo una configuración de toda la celda.
Perfundir aCSF con una alta concentración de potasio, que despolariza la membrana de la neurona.
La despolarización abre los canales de sodio, desencadenando un potencial de acción, que a su vez activa los canales de calcio dependientes de voltaje y permite la entrada de calcio.
Los iones de calcio se unen al indicador, mejorando la fluorescencia, que se puede visualizar bajo una iluminación adecuada.
El aumento de la fluorescencia intracelular, causado por la entrada de calcio después de la aplicación de potasio, indica viabilidad neuronal de
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