Determinación de la disrupción de la barrera hematoencefálica mediante colorantes fluorescentes en un modelo de ratón EAE

Comience con una solución que contenga un tinte fluorescente verde unido a una cadena grande de dextrano. Luego, agregue una solución de tinte rojo unido a una pequeña cadena de dextrano.

Mezcle bien los tintes y tómelos en una jeringa.

Inyecte esta mezcla de tinte por vía intravenosa en un ratón anestesiado a través del seno retroorbitario, una vena detrás del ojo.

Este ratón sufre de encefalomielitis autoinmune experimental o EAE.

En esta afección, la barrera hematoencefálica se altera con uniones estrechas debilitadas entre las células endoteliales de los vasos sanguíneos del cerebro con espacios.

Permita que el ratón se despierte por completo y recupere la motilidad, permitiendo que los tintes circulen.

El tinte rojo con la pequeña cadena de dextrano se difunde fácilmente a través de los pequeños espacios en el tejido cerebral, mientras que el tinte verde unido a la gran cadena de dextrano se difunde si el daño es grave.

La cantidad de cada tinte fluorescente en el tejido cerebral se correlaciona con la extensión de la interrupción de la barrera hematoencefálica.

Para preparar soluciones madre de dextrano, disuelva 10 miligramos de tres kilodalton Dextran Texas Red en 500 microlitros de solución de cloruro de sodio al 0,9% y 5 miligramos de 10 kilodalton Dextran AlexaFluor 488 en 250 microlitros de solución de cloruro de sodio al 0,9%.

Para la solución de trabajo de dextrano, justo antes de la inyección, pipetee 55 microlitros de solución madre de 10 kilodalton Dextran AlexaFluor 488 en un trozo de película de sellado, luego, agregue 55 microlitros de solución madre de tres kilodalton Dextran Texas Red. Mezcle y recoja 100 microlitros en una jeringa fina desechable.

A continuación, coloque un ratón anestesiado en posición lateral sobre la mesa. Inyecte por vía intravenosa 100 microlitros de trazadores fluorescentes en el ratón antes de que el ratón se despierte. Deje que el marcador circule durante 15 minutos.