Evaluación de la función motora en un modelo experimental de ratón con neuritis autoinmune

Coloque un mouse en una cinta de correr para registrar su movimiento de carrera, evaluando su función motora, que representa la capacidad de controlar los movimientos del cuerpo.

Después de la prueba, inyecte la toxina de la tos ferina en la cavidad abdominal del ratón anestesiado, para debilitar su barrera hematonerviosa.

A continuación, retire el vello entre los omóplatos del ratón, desinfecte el área e inyecte péptidos que imitan la mielina con un adyuvante en el tejido subcutáneo.

Repita ambas inyecciones para obtener reacciones óptimas.

Los péptidos estimulan las células presentadoras de antígenos, que migran a los ganglios linfáticos y producen células T autorreactivas.

Estas células T ingresan al torrente sanguíneo, cruzan la barrera hematonerviosa deteriorada y se dirigen a los nervios periféricos, lo que lleva a la liberación de citocinas.

Esto atrae a los macrófagos y las células B, que liberan moléculas efectoras que degradan la vaina de mielina.

La descomposición de la mielina afecta la transmisión de señales nerviosas y la aparición de neuritis autoinmune experimental o EAN.

Finalmente, repita la prueba de la cinta de correr. El ratón muestra dificultad para correr y coordinar los movimientos de las extremidades, lo que indica disfunción motora.

Tres días antes de la inducción de la enfermedad, encienda el aparato de evaluación de la función motora y encienda el botón de luz. Levanta el ratón y bájalo sobre un recipiente con colorante alimentario rojo. Coloque el mouse en el compartimiento para caminar y ajuste la velocidad de la cinta de correr a 15 centímetros por segundo. Encienda la cinta de correr y haga clic en "grabar" para usar el sistema de imágenes de la función de marcha para capturar el movimiento de carrera del mouse durante 36 segundos.

Después de 36 segundos, detenga la grabación y la cinta de correr, y guarde el archivo de video de la carrera de práctica en la carpeta designada.

Un día antes de la primera inmunización, use una jeringa de 0,5 mililitros equipada con una aguja de calibre 30_1/2 para administrar 1,6 microgramos por mililitro de toxina de tos ferina en 250 microlitros de PBS IP isotónico de ratón, a ratones machos C57 negros 6 anestesiados de seis a ocho semanas de edad.

Al día siguiente, combine volúmenes iguales de soluciones de péptido recién preparadas en solución salina al 0,9% y 20 miligramos por mililitro de Mycobacterium tuberculosis en un adyuvante completo de Freund en un batidor de perlas, y mezcle las soluciones a la velocidad máxima durante 1 minuto a temperatura ambiente.

Cargue una jeringa equipada con una aguja de calibre 23 con el inóculo, e invierta y agite la jeringa antes de evacuar el aire dentro del eje de la jeringa.

Antes de administrar el inóculo, retire el vello justo lateral a la línea media entre las escápulas y desinfecte la piel expuesta con etanol al 70%.

Luego, use un par de fórceps Addison para agarrar la piel y administrar 50 microlitros de la solución al ratón inyectado con toxina de tos ferina mediante inyección subcutánea.

A la mañana siguiente, administre 1,2 microgramos por mililitro de toxina de la tos ferina en 250 microlitros de PBS IP, como se acaba de demostrar, seguido de otra inyección de 1,2 microgramos por mililitro de toxina de la tos ferina IP 48 horas después.

Tres días después, después de la tercera inyección de tos ferina, administre otros 50 microlitros de inóculo recién preparado en el mismo lugar de inyección que antes, y controle la puntuación clínica y la función motora de los animales dos veces por semana hasta el final del experimento.