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Comience inyectando por vía subcutánea una emulsión que contenga un péptido neuronal y un adyuvante bacteriano muerto por calor en un ratón anestesiado.
En el tejido subcutáneo, el adyuvante atrae células presentadoras de antígenos, o APC, que procesan y presentan los péptidos neuronales en los principales complejos de histocompatibilidad.
Las APC activadas llegan a los ganglios linfáticos e interactúan con las células T vírgenes, induciendo su diferenciación en células T autorreactivas.
Estas células T circulan y llegan a la barrera hematoencefálica o BBB.
A continuación, inyecte exotoxinas derivadas de bacterias por vía intraperitoneal.
Las exotoxinas llegan a la BBB, aumentando su permeabilidad y permitiendo la infiltración de células T en el sistema nervioso central (SNC).
En el SNC, las células T interactúan con las APC residentes que presentan el péptido neuronal, promoviendo la liberación de citoquinas que induce una mayor infiltración de células inmunitarias.
Las células inmunitarias liberan citoquinas proinflamatorias, causando daño a la mielina.
Además, las células B interactúan con las células T y secretan autoanticuerpos que dañan aún más la mielina, estableciendo una encefalomielitis autoinmune experimental (EAE).
En este procedimiento, disuelva PTX a 2 microgramos por mililitro en 1x PBS y mezcle bien. Luego, inyecte 100 microlitros de PLP / CFA en los ratones por vía subcutánea, dos veces en la base de la cola durante la anestesia corta con isoflurano. No se inyecte en la parte posterior del cuello, ya que cualquier reacción inmunitaria en la piel de la parte superior de la espalda o el cuello alterará las imágenes de la cabeza y la médula espinal.
Una o dos horas después de la inmunización, inyecte 100 microlitros de PTX en los ratones por vía intraperitoneal.
Luego, 24 horas después de la inmunización, inyecte a los ratones 100 microlitros de PTX nuevamente. Para los ratones de control, inyecte 100 microlitros de CFA sin PLP dos veces, en la base de la cola.