Análisis microscópico de sinapsis en cortes de hipocampo de ratón mediante inmunofluorescencia

Coloque una rebanada de hipocampo de un cerebro de ratón en un pozo que contenga un búfer. El corte contiene una red de neuronas que se comunican a través de sinapsis.

Los terminales de las neuronas presinápticas contienen vesículas llenas de neurotransmisores con transportadores transmembrana característicos, mientras que los terminales postsinápticos presentan proteínas de andamio características que regulan los receptores de neurotransmisores. Ambos sirven como marcadores clave para las estructuras sinápticas.

Reemplace el tampón con una solución bloqueadora de la permeabilización e incube con agitación para permeabilizar las membranas celulares y bloquear los sitios de unión no específicos.

Agregue anticuerpos primarios dirigidos a los marcadores presinápticos y postsinápticos e incube con agitación para permitir la unión.

Lave la rebanada, agregue anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos específicos para los anticuerpos primarios e incube con agitación en la oscuridad.

Lava la rebanada y luego móntala en una diapositiva.

Con un microscopio confocal, identifique la región de interés y amplíe para visualizar las sinapsis.

Capture imágenes para identificar los marcadores pres