Cuantificación de la distribución de una proteína presináptica en el cerebro de ratón mediante inmunofluorescencia

Tome un corte de cerebro de ratón fijado químicamente incrustado en un medio de inclusión de tejido.

Lave la rebanada con tampón para eliminar el medio.

Agregue una solución que permeabilice las membranas y bloquee los sitios de unión no específicos.

Retire la solución.

Para visualizar las proteínas sinápticas neuronales, incube el corte con anticuerpos primarios.

Estos anticuerpos se dirigen a una proteína presináptica expresada en las sinapsis de regiones específicas del cerebro y a una proteína sináptica expresada de forma ubicua como marcador de referencia.

Lavar con tampón para eliminar los anticuerpos no unidos.

Introducir anticuerpos secundarios marcados con fluoróforo que se dirijan a los anticuerpos primarios.

Lavar con tampón para eliminar los anticuerpos secundarios no unidos.

Contratiñe los núcleos con un tinte de unión al ADN.

Lave con tampón y monte la rebanada con un medio de montaje adecuado.

Visualice el corte bajo un microscopio confocal.

Calcule las relaciones medias de intensidad de fluorescencia de la proteína diana y el marcador de referencia para analizar la distribución de la proteína diana en diferentes regiones del cerebro.

Para preparar las rodajas para l