Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 6:37 min. • May 29th, 2025
Asegure un ratón anestesiado con una ventana craneal sobre su corteza motora en una cinta de correr.
El ratón expresa un reportero de proteína quinasa-A en las neuronas corticales.
Coloque la cinta de correr debajo de un objetivo FLIM de dos fotones.
Agrega una gota de agua entre el objetivo y la ventana craneal.
Permita que el mouse se despierte y se aclimate a la cinta de correr.
Usando iluminación de campo claro, ubique la región de imágenes. Cierre la carcasa del microscopio para bloquear la luz externa.
Establezca los parámetros de imagen, inicie la rotación de la cinta de correr para inducir la locomoción y comience a obtener imágenes.
La locomoción forzada activa la PKA, que fosforila al reportero, acercando sus fluoróforos donantes y aceptores.
El microscopio dirige un láser infrarrojo, excitando al donante para que transfiera energía al aceptor, reduciendo la vida útil de fluorescencia del donante.
Cuando la locomoción se detiene, PKA y el reportero vuelven a sus estados inactivos, disminuyendo la transferencia de energía y aumentando la vida útil de fluorescencia del donante.
Analice las imágenes para comparar los niveles corticales de PKA durante el reposo y la locomoción.
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