El desarrollo de bronquiolitis obliterante en un modelo murino de trasplante de pulmón ortotópico

El objetivo general de este procedimiento es establecer un modelo literario de bronquiolitis en espejo del trasplante pulmonar ortotópico. Esto se logra recolectando primero el pulmón donado de un ratón C 57 BL 10. El segundo paso es preparar el manguito para el bronquio, la arteria pulmonar y la vena para la anastomosis.

A continuación, el pulmón del donante preparado se trasplanta al ratón receptor C five seven BL six. El paso final es observar al ratón trasplantado durante 21 o 28 días después del trasplante. En última instancia, el análisis histológico se utiliza para mostrar lesiones de bronquiolitis literarias en el pulmón trasplantado.

La principal ventaja de este modelo en comparación con el modelo de trasplante heterotópico de vía aérea es que el modelo actual imita la condición humana. En general, los individuos nuevos en este método tendrán dificultades porque las estructuras superiores en los ratones son muy delicadas y más susceptibles a las lesiones porque las masas son solo una décima parte de la masa de la rata. Coloque al ratón donante en una cámara de retención sellada e induzca la anestesia con 5% de flúor. A continuación, use el catéter intravenoso de calibre 20 para intubar al ratón o Trae, y luego colóquelo en un ventilador para roedores.

Mantener la anestesia con uno a 2% de flúor. Después de asegurarse de que el ratón está completamente anestesiado por no responder al movimiento de la cola y al pellizco de los dedos de los pies, colóquelo en posición supina y prepare el abdomen con alcohol al 70%. Ahora, corta la piel que recubre el abdomen con unas tijeras y expone la musculatura abdominal.

A continuación, realice una esternotomía lapar haciendo primero una incisión en la línea media a través de la pared abdominal y, a continuación, cortando transversalmente el esternón, aleje los intestinos y localice la vena cava inferior, que está justo debajo del hígado. Inyecte heparina a 100 microlitros por kilogramo en la VCI. A continuación, tire hacia abajo del ligamento falciforme del hígado y corte el diafragma a lo largo de la unión causal ventral hacia la columna vertebral.

Corta ambos lados de la pared torácica hasta el cuello para exponer la cavidad torácica. Corta la caja torácica bilateralmente mientras proteges el pulmón y retiras el timo. A continuación, corte la VCI intratorácica a nivel del diafragma.

Ahora localice el corazón y extirpe el apéndice auricular derecho. A continuación, haga una incisión transversal en la raíz del tronco de la arteria pulmonar y utilice la incisión para enjuagar los pulmones con dos mililitros de ringers lactatos enfriados y 0,1 mililitros de heparina. Exponga la tráquea y luego córtela junto con el esófago.

Ahora detenga la ventilación a dos tercios del inflado final de la marea. Extirpe el bloque largo del corazón y guárdelo en hielo. Coloque una gasa en el pulmón extirpado para protegerlo de la luz.

Incidir el ligamento pulmonar hasta la vena pulmonar o pv. Extirpar el esófago y la aorta para localizar el hilio. Encuentra la arteria pulmonar o pa, que se encuentra en la cara más craneal del hilio y el bronquio principal adjunto.

Diseccione cuidadosamente la arteria pulmonar lejos del bronquio. Ahora, haga un manguito de PA a partir de un catéter intravenoso de calibre 24 cortándolo a 0,5 milímetros de largo con una extensión de 0,7 milímetros. La superficie del puño está trenzada AB.

Con el fin de proporcionar una superficie para la anastomosis, haga un manguito para el bronquio utilizando un material similar al manguito de PA, solo que usando un catéter de calibre 20 cortado a una longitud de un milímetro con una extensión de 0,7 milímetros. El tamaño del manguito PV varía según el peso del ratón donante. Para ratones que pesan de 24 a 27 gramos.

El tamaño del brazalete es de calibre 22 con una longitud de 0,7 milímetros y una extensión de 0,7 milímetros para ratones que pesan entre 27 y 32 gramos. Las longitudes son las mismas, pero se utiliza un catéter de calibre 20. Ahora, inserte los manguitos en la lente distal de la arteria pulmonar, la vena pulmonar y el bronquio, asegurando cada uno con nueve suturas de seda.

Después de que todos los puños se hayan colocado correctamente. Envuelva el pulmón del donante preparado en una gasa empapada en ringers lactatos y colóquelo en hielo hasta el trasplante. Para preparar al ratón receptor, se induce la anestesia y se coloca ventilación mecánica de la misma manera que se utilizó para el donante.

Afeita la pared torácica izquierda y prepárala con alcohol al 70%. Comience haciendo una incisión de toracotomía en el espacio intercostal del tercio izquierdo. Extienda la incisión dorsalmente cerca de la columna vertebral.

Asegúrese de que el campo quirúrgico esté cubierto de manera estéril y coloque una pinza de microvasos en los vasos pulmonares izquierdos y el bronquio adyacente al corazón. La arteria pulmonar se puede visualizar en la cara craneal, la vena pulmonar en el extremo mimoso del hilio y el bronquio entre ellas. A continuación, utilice una tracción suave en un hemostático para provocar una tensión leve en la PA, la VP y los bronquios.

Deje las estructuras hiliares pinzadas y reseque cuidadosamente el pulmón izquierdo. Aísle la arteria pulmonar, la vena pulmonar y el bronquio, y luego coloque una sutura de oh, sin apretar, alrededor de cada estructura. Diseccionar completamente el PA de su vaina adventicial y luego hacer una pequeña incisión transversal de aproximadamente un cuarto de la circunferencia del vaso en la pared anterior.

Dejando intacta la continuación de la parte dorsal de la arteria, obtenga el pulmón donante, que está envuelto en una gasa de algodón empapada en ringers lactatos fríos, y colóquelo en la cavidad torácica. A continuación, inserte los manguitos en el receptor pa, PV y bronquios para crear anastomosis y látelos con nano sutura. A continuación, extraiga el pulmón receptor.

A continuación, retire la pinza transversal hiliares, que permite la reperfusión y la ventilación. Vuelva a colocar el pulmón trasplantado en el tórax receptor y cierre la incisión de la toracotomía. Usando cinco suturas de oh, el ratón ahora debería recuperarse de la anestesia. La buprenorfina se puede administrar para aliviar el dolor después de que el ratón haya recuperado la conciencia.

En esta tabla se muestran las puntuaciones histológicas de rechazo agudo y prevalencia de bronquiolitis literaria u OB. La puntuación post-trasplante de rechazo agudo se denomina puntuación A. Las combinaciones de aloinjertos muestran una patología de rechazo considerablemente más aguda o crónica en comparación con el injerto ISO. Además, la prevalencia de bronquiolitis literaria fue significativamente mayor en las combinaciones de aloinjerto que en el injerto ISO a los 21 y 28 días después del trasplante.

Aquí se muestran los macrohallazgos y la histopatología a los 28 días después del trasplante pulmonar. Estas imágenes representan los macrohallazgos y el pulmón de injerto ISO teñido con H y E, y el pulmón ingenuo derecho. Estas imágenes representan un aloinjerto pulmonar BL 10 teñido con trirrema h y masen trasplantado a un receptor de ratón BL seis, que desarrolló OB y no OB respectivamente.

La flecha blanca en una B identifica las lesiones OB. Este panel muestra el aloinjerto pulmonar BL six trasplantado en un receptor de ratón BL 10 una vez dominado. Esta técnica se puede realizar en casi media hora si se realiza correctamente.

La utilidad de esta técnica es que se puede utilizar para responder preguntas mecanicistas sobre la disfunción primaria del injerto, el rechazo agudo y la bronquiolitis ablativa después del trasplante pulmonar.