Un método mejorado para la rápida y precisa medición de rendimiento en vuelo Drosophila

El objetivo general de este procedimiento es medir de forma rápida y precisa el rendimiento de vuelo en Drosophila. Esto se logra dejando caer primero las moscas en un cilindro de vuelo. El segundo paso del procedimiento es obtener imágenes de la superficie de aterrizaje con una cámara digital.

El paso final es analizar los datos utilizando un software de imágenes midiendo la altura de aterrizaje de cada mosca. En última instancia, este procedimiento ayuda a identificar mutaciones y condiciones como el envejecimiento o la neurodegeneración, que afectan la capacidad de vuelo y ayuda a cuantificar el rendimiento de vuelo. La principal ventaja de esta técnica sobre los métodos existentes, como el probador de vuelo original, es que es más apropiado para pantallas de alto rendimiento para mutantes y otras condiciones que perjudican el vuelo.

La primera vez que tuvimos la idea de este método fue cuando nos dimos cuenta de cuánto tiempo implicaba probar un gran número de genotipos utilizando el probador de vuelo original. Asegure el cilindro de vuelo a un soporte de anillo con abrazaderas de cadena. Deje aproximadamente tres centímetros debajo del cilindro para el plato de vía.

Cargue la antena con una fina capa de aceite mineral y deslícela por debajo del cilindro de vuelo. Asegure el embudo a un segundo soporte de anillo. Ajuste la altura del embudo para que la parte inferior del embudo quede al ras con la parte superior del cilindro de vuelo.

La parte más estrecha del embudo debe ser más estrecha que un vial de mosca. El diámetro del tubo de caída debe ser ligeramente más ancho que el de un vial para moscas, de modo que el vial pueda caer libremente. Inserte el tubo de caída en la parte superior del embudo y asegúrelo con una abrazadera de garra.

A continuación, de una lámina de poliacrilamida, corte una pieza rectangular de la longitud del cilindro de vuelo con un ancho ligeramente menor que la circunferencia interior del cilindro de vuelo. Aplique una capa delgada de adhesivo para atrapar enredos a la hoja, dejando suficiente espacio en la parte superior e inferior sin recubrimiento para sostener la hoja. Después de que el adhesivo de la hoja se haya secado durante una hora, deslice la hoja en el cilindro de vuelo con el adhesivo hacia adentro.

A continuación, ensamble el riel de la cámara con soportes de soporte de pino. Asegúrese de que la parte inferior de la pista pueda soportar la cámara sin bloquear el objetivo. A continuación, atornille los topes en su lugar donde no interrumpan la vista de la cámara de la lámina de plástico.

Recoja viales de moscas para analizarlos con no más de 20 moscas por vial. Golpee suavemente las moscas en el fondo del vial. Desenchufe el vial e insértelo en el tubo de bajada.

Libere el vial. Cuando el vial golpea las paredes del embudo de estrechamiento, las moscas que son expulsadas al cilindro de vuelo. Levante el tubo de caída para extraer el vial vacío y cargue más moscas si lo desea.

Se pueden analizar y obtener imágenes fácilmente de hasta 200 moscas cargadas en 10 viales en una sola hoja de poliacrilamida. Ahora, retire la lámina de plástico y colóquela sobre una superficie blanca plana Se puede usar una cartulina blanca si las mesas de trabajo son de color oscuro. Ensamble el riel de la cámara sobre la lámina de plástico.

La cámara debe estar lo suficientemente alta por encima de la hoja para tener tanto la parte superior como la inferior de la hoja en el campo de visión. Deslice la cámara a lo largo de la pista mientras mantiene presionado el botón de captura para obtener una imagen panorámica. El número de moscas que aterrizan en el aceite en el plato debajo de la cámara de vuelo se puede contar manualmente.

Para cada ensayo entre ensayos, las moscas se pueden eliminar de la hoja y la hoja se puede reutilizar. Abra los archivos de imagen en el software image J, recorte las imágenes si es necesario para incluir solo el área de la superficie de aterrizaje. La trampa de enredos recubierta de área.

Convierta las imágenes a una escala de grises de ocho bits y cree un umbral. Para filtrar el fondo blanco. Establezca los parámetros para identificar cada mosca.

Mediante el menú analizar partículas, defina los parámetros. Se utiliza para identificar una partícula utilizando el aparato de demostración. Un área de cinco a 90 píxeles cuadrados y una circularidad de 0,4 a 1,0 identificarán con precisión todas las muestras.

Ahora, mida la ubicación de cada mosca usando la lista generada de coordenadas para cada partícula. La coordenada X en píxeles se puede convertir a centímetros. Para calcular la altura de aterrizaje, importe la tabla en una hoja de cálculo y continúe con el análisis.

El rendimiento de vuelo de las moscas mutantes de empuje lento, que tienen un defecto de vuelo conocido, se comparó con las moscas de cantón de tipo salvaje. Todas las moscas tenían tres días de edad, criadas a temperatura ambiente, las moscas de control se posaban constantemente cerca de la parte superior del cilindro. La propagación del desembarco fue mucho mayor para los mutantes de empuje lento.

La altura media de aterrizaje de los cantones, a 73 centímetros, fue significativamente mayor que la de los mutantes de empuje lento, a 44 centímetros. Después de este procedimiento, se pueden utilizar métodos adicionales, como la histología, para responder preguntas adicionales sobre la integridad estructural de los músculos de vuelo, las neuronas motoras o las uniones neuromusculares. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo puede evaluar rápidamente el rendimiento de vuelo en oph.