Un ensayo rápido y específico de microplacas para la Determinación de ascorbato intra y extracelular en células cultivadas

El objetivo general del siguiente experimento es determinar los niveles de ascorbato intracelular o extracelular en células cultivadas o aisladas. Esto se logra incubando extractos de células o células enteras con una puntuación oxidasa para agotar selectivamente una puntuación BA en los pasos siguientes. En el primer método, los extractos celulares se incuban con cianuro para generar ferrocianuro de una manera dependiente del ascorbato, lo que da una representación directa de la cantidad de ascorbato en los extractos.

A continuación, se determina la cantidad de ferrocianuro formado en los extractos celulares oxidando cuantitativamente el ferrocianuro con hierro férrico añadido para formar hierro ferris con el fin de generar un complejo cromogénico de hierro dos ferne S que se puede cuantificar espectrofotométricamente. En el segundo método, todas las células se incuban directamente con el quelante de hierro ferne S y citrato férrico. Los resultados muestran diferencias en los niveles de ascorbato intracelular o extracelular en función de la reducción cuantitativa y específica de los complejos de hierro extracelular que se pueden detectar.