Método para la obtención de las células del cáncer de ovario primarios a partir de muestras sólidas
4 de febrero de 2014
Este estudio describe un método detallado para el aislamiento y caracterización de células de cáncer de ovario primarios de muestras clínicas sólidos. Especímenes clínicos sobre el cáncer de ovario son sometidas a digestión enzimática para obtener, fibroblastos-epitelial libre de cáncer de ovario de células viables (EOC) muy adecuada para aplicaciones posteriores.
El objetivo general de este procedimiento es aislar y caracterizar las células primarias de cáncer de ovario a partir de muestras clínicas sólidas. Esto se logra recolectando primero la muestra del tumor ovárico y colocándola en una placa de Petri. El segundo paso es cortar la muestra en pedazos y transferir los pedazos a un tubo cónico con reactivos de digestión para la incubación.
A continuación, la suspensión de células se pasa a través de un filtro donde solo se recogen las células Para la centrifugación, el paso final es desechar el sobrenadante y resuspender las células en medios para la incubación durante la noche. En última instancia, las células epiteliales de cáncer de ovario crecerán en cultivo durante semanas, lo que permite aplicaciones posteriores. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del cáncer de ovario, como cuál es la mejor opción de tratamiento para cada paciente en particular.
Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia el tratamiento del cáncer de ovario porque nos permite utilizar cultivos celulares más realistas, que son muy susceptibles a la manipulación genética y son más útiles para las pruebas de cribado de fármacos. Para empezar, suplementar 500 mililitros de delcos, águilas modificadas, medio o DMEM con un 10% de suero fetal bovino o FBS y un 1% de penicilina, estreptomicina o ps. Almacene el medio a cuatro grados centígrados.
Recoja la muestra del quirófano y transpórtela en hielo al laboratorio aún dentro del contenedor transportado. Coloque la muestra en una campana de seguridad biológica. Transfiera la muestra de un tubo cónico de 50 mililitros a una placa de Petri de 60 milímetros por 60 milímetros que contenga 10 mililitros de PBS fresco y helado.
A continuación, con una cuchilla de afeitar estéril, corte la muestra en trozos de dos milímetros o más pequeños. A continuación, trate el DMEM con un tubo de pasta en disco en un tubo cónico de 15 litros. Transfiera los pañuelos picados al tubo de mezcla DMEM dispa dos.
A continuación, incubar la muestra al 5% de dióxido de carbono y a 37 grados centígrados durante 30 minutos. Agite manualmente la suspensión celular cada cinco minutos para garantizar una digestión óptima. Después de la incubación, transfiera la suspensión celular a través de un filtro de células de malla de 70 micrómetros colocado encima de un tubo cónico de 50 mililitros.
Aplique presión suavemente contra la malla con un émbolo de jeringa, deseche cualquier tejido no asociado que quede en la parte superior de la malla y recoja la suspensión celular obtenida en el tubo cónico estéril de 50 mililitros. A continuación, centrifugar. El tubo cónico a 320 veces G durante siete minutos a cuatro grados centígrados.
Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el pellet celular en 10 mililitros de DMEM que contengan 10% de FBS y 1% de ps. A continuación, transfiera la suspensión celular a una placa de Petri e incube la suspensión al 5% de dióxido de carbono y a 37 grados centígrados. Cambie el medio 24 horas después de la siembra inicial para eliminar los restos celulares y la mayoría de los eritrocitos presentes en el cultivo.
Por último, cambie el medio cada tres días durante las dos semanas siguientes, después de lo cual los cultivos de células EOC primarias están listos para aplicaciones posteriores. Inmediatamente después del enchapado. Las células epiteliales de cáncer de ovario o células EOC aparecen como suspensiones unicelulares y en grupos con abundantes eritrocitos y restos celulares.
El cultivo de células EOC tres días después de la siembra muestra grupos de células EOC semiadherentes y menos contaminación de eritrocitos. Una semana después de la siembra inicial, el cultivo celular EOC se convierte en un grupo de células en forma de remolino que se extiende en el plástico del cultivo de tejidos. La morfología típica de los adoquines epiteliales se puede ver en una monocapa confluente de células EOC después de 14 días en cultivo.
Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo aislar y caracterizar las células de cáncer de ovario primario a partir de muestras clínicas sólidas.
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Resumen
Este estudio describe un método detallado para el aislamiento y la caracterización de células primarias de cáncer ovárico a partir de especímenes clínicos sólidos. El procedimiento permite el crecimiento de células de cáncer epitelial de ovario en cultivo, facilitando aplicaciones posteriores.
Componentes Clave del Estudio
Área de la ciencia
- Oncología
- Biología celular
- Investigación clínica
Antecedentes
- El cáncer de ovario es un problema de salud importante con opciones de tratamiento complejas.
- El aislamiento de células cancerosas viables es crucial para la medicina personalizada.
- Los métodos actuales pueden no producir células puras de cáncer epitelial de ovario.
- Este estudio tiene como objetivo mejorar el proceso de aislamiento para obtener mejores resultados en la investigación.
Objetivo del estudio
- Aislar células primarias de cáncer de ovario a partir de especímenes clínicos.
- Caracterizar las células aisladas para aplicaciones posteriores.
- Mejorar la comprensión de las opciones de tratamiento para pacientes con cáncer de ovario.
Métodos Utilizados
- Recolección de especímenes de tumores ováricos.
- Digestión enzimática de las muestras de tejido.
- Filtración para aislar células viables.
- Centrifugación y resuspensión en medio para cultivo.
Resultados principales
- Aislamiento exitoso de células de cáncer epitelial de ovario libres de fibroblastos.
- Las células pueden cultivarse durante semanas, lo que permite un estudio extenso.
- El método proporciona una fuente confiable de células cancerosas para la investigación.
- Potencial para orientar estrategias de tratamiento personalizadas.
Conclusiones
- El método descrito es efectivo para aislar células de cáncer de ovario.
- Apoya investigaciones futuras sobre tratamientos para el cáncer de ovario.
- Estudios posteriores pueden basarse en este método para mejorar los resultados en pacientes.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
El establecimiento de células de cáncer ovárico primario a partir de especímenes clínicos sólidos permite crear modelos relevantes para el paciente que reducen la dependencia de líneas celulares pasadas con artefactos genéticos acumulados. Este enfoque apoya la reducción mecanicista de riesgos en la validación de dianas al preservar la heterogeneidad tumoral y la biología específica del sitio procedente de lesiones primarias o metastásicas. Los cultivos resultantes proporcionan una fuente renovable para ensayos posteriores, mejorando la confianza predictiva en la toma de decisiones preclínicas.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biotecnología Farmacéutica
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Valor científico: Permite la evaluación de hipótesis terapéuticas utilizando células que reflejan el perfil genético y fenotípico de la muestra clínica original.
- Valor operativo: Reduce la ambigüedad mecanicista al evitar los artefactos asociados con líneas celulares pasadas a largo plazo.
- Valor predictivo: Facilita la selección de carteras mediante la validación de dianas biológicamente desprovista de riesgos en un sistema relevante para la enfermedad.
Desarrollo de Cribado y Ensayos
- Valor científico: Produce células de cáncer epitelial de ovario adecuadas para la selección de fármacos con propiedades tumorigénicas mantenidas.
- Valor operativo: Proporciona suspensiones celulares estandarizadas y reproducibles tras la digestión enzimática y la filtración.
- Escalabilidad: Permite la preparación de múltiples cultivos primarios a partir de diversos especímenes para pruebas de ensayo paralelas.
Investigación Traductacional y Preclínica
- Continuidad Translacional: Conecta el descubrimiento y el trabajo preclínico mediante el uso de células derivadas directamente de muestras de pacientes.
- Alineación de Biomarcadores: Facilita la evaluación de dianas y biomarcadores en un contexto que refleja el tumor del paciente.
- Avance Ajustado al Riesgo: Orienta las decisiones de continuar o no continuar basadas en respuestas en células primarias que predicen mejor los resultados clínicos.
Integración de la canalización y flujo de trabajo
El método se integra en el continuo de descubrimiento desde la biología inicial hasta la identificación de compuestos activos, proporcionando células primarias que aumentan la relevancia de los esfuerzos posteriores de cribado y validación.
- Biología del Descubrimiento: Apoya la prueba de hipótesis y la aclaración de vías mediante el uso de células con características específicas de tumores intactas.
- Cribado: Proporciona células primarias de cáncer epitelial de ovario listas para ensayos, con crecimiento y morfología cuantificables, para la evaluación de compuestos.
- Análisis: Permite la medición de la respuesta a fármacos, la proliferación y los cambios fenotípicos en un sistema genéticamente estable y de bajo número de pasajes.
- Investigación Traducional: Mantiene la relevancia clínica mediante la obtención directa a partir de muestras, lo que favorece la validación de biomarcadores y dianas terapéuticas.
- Reutilización Empresarial: Establece una plataforma reutilizable para generar cultivos primarios a partir de diversas muestras, reduciendo la dependencia de líneas celulares limitadas.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Aumenta la confianza predictiva mediante el uso de células que reflejan la heterogeneidad y la biología del tumor original.
- Valor operativo: Garantiza la reproducibilidad mediante pasos estandarizados de digestión enzimática, filtración e inicio del cultivo.
- Valor estratégico: Mejora la eficiencia del capital al reducir el riesgo de fracaso en fases avanzadas mediante una mejor validación preclínica de objetivos.
- Impacto en la cartera: Permite la priorización ajustada al riesgo de candidatos basada en la actividad en células primarias derivadas de pacientes.
Consideraciones de Implementación
- Requiere experiencia en el manejo estéril de tejidos, digestión enzimática y técnicas de cultivo celular primario.
- Depende del acceso a especímenes frescos o adecuadamente conservados de tumores ováricos recolectados bajo condiciones estériles.
- Necesita equipos de centrifugación, filtración y cultivo, incluyendo campanas de seguridad biológica e incubadoras de CO2.
- Implica la optimización del tiempo de digestión y la disociación mecánica para maximizar el rendimiento de células epiteliales mientras se minimiza la contaminación por fibroblastos.
- Está limitado por la disponibilidad y viabilidad del espécimen, que puede variar según el momento quirúrgico y las condiciones de transporte.
