Método para la obtención de las células del cáncer de ovario primarios a partir de muestras sólidas

El objetivo general de este procedimiento es aislar y caracterizar las células primarias de cáncer de ovario a partir de muestras clínicas sólidas. Esto se logra recolectando primero la muestra del tumor ovárico y colocándola en una placa de Petri. El segundo paso es cortar la muestra en pedazos y transferir los pedazos a un tubo cónico con reactivos de digestión para la incubación.

A continuación, la suspensión de células se pasa a través de un filtro donde solo se recogen las células Para la centrifugación, el paso final es desechar el sobrenadante y resuspender las células en medios para la incubación durante la noche. En última instancia, las células epiteliales de cáncer de ovario crecerán en cultivo durante semanas, lo que permite aplicaciones posteriores. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del cáncer de ovario, como cuál es la mejor opción de tratamiento para cada paciente en particular.

Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia el tratamiento del cáncer de ovario porque nos permite utilizar cultivos celulares más realistas, que son muy susceptibles a la manipulación genética y son más útiles para las pruebas de cribado de fármacos. Para empezar, suplementar 500 mililitros de delcos, águilas modificadas, medio o DMEM con un 10% de suero fetal bovino o FBS y un 1% de penicilina, estreptomicina o ps. Almacene el medio a cuatro grados centígrados.

Recoja la muestra del quirófano y transpórtela en hielo al laboratorio aún dentro del contenedor transportado. Coloque la muestra en una campana de seguridad biológica. Transfiera la muestra de un tubo cónico de 50 mililitros a una placa de Petri de 60 milímetros por 60 milímetros que contenga 10 mililitros de PBS fresco y helado.

A continuación, con una cuchilla de afeitar estéril, corte la muestra en trozos de dos milímetros o más pequeños. A continuación, trate el DMEM con un tubo de pasta en disco en un tubo cónico de 15 litros. Transfiera los pañuelos picados al tubo de mezcla DMEM dispa dos.

A continuación, incubar la muestra al 5% de dióxido de carbono y a 37 grados centígrados durante 30 minutos. Agite manualmente la suspensión celular cada cinco minutos para garantizar una digestión óptima. Después de la incubación, transfiera la suspensión celular a través de un filtro de células de malla de 70 micrómetros colocado encima de un tubo cónico de 50 mililitros.

Aplique presión suavemente contra la malla con un émbolo de jeringa, deseche cualquier tejido no asociado que quede en la parte superior de la malla y recoja la suspensión celular obtenida en el tubo cónico estéril de 50 mililitros. A continuación, centrifugar. El tubo cónico a 320 veces G durante siete minutos a cuatro grados centígrados.

Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el pellet celular en 10 mililitros de DMEM que contengan 10% de FBS y 1% de ps. A continuación, transfiera la suspensión celular a una placa de Petri e incube la suspensión al 5% de dióxido de carbono y a 37 grados centígrados. Cambie el medio 24 horas después de la siembra inicial para eliminar los restos celulares y la mayoría de los eritrocitos presentes en el cultivo.

Por último, cambie el medio cada tres días durante las dos semanas siguientes, después de lo cual los cultivos de células EOC primarias están listos para aplicaciones posteriores. Inmediatamente después del enchapado. Las células epiteliales de cáncer de ovario o células EOC aparecen como suspensiones unicelulares y en grupos con abundantes eritrocitos y restos celulares.

El cultivo de células EOC tres días después de la siembra muestra grupos de células EOC semiadherentes y menos contaminación de eritrocitos. Una semana después de la siembra inicial, el cultivo celular EOC se convierte en un grupo de células en forma de remolino que se extiende en el plástico del cultivo de tejidos. La morfología típica de los adoquines epiteliales se puede ver en una monocapa confluente de células EOC después de 14 días en cultivo.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo aislar y caracterizar las células de cáncer de ovario primario a partir de muestras clínicas sólidas.