Obtención de células primarias de cáncer de ovario a partir de muestras sólidas: un método para cultivar células epiteliales de cáncer de ovario a partir de muestras de tumores de ovario

Las células epiteliales presentes en la superficie externa del ovario pueden sufrir una transformación maligna en células cancerosas que pueden convertirse en tumores ováricos.

Para aislar estas células epiteliales de cáncer de ovario o EOC, comience tomando una muestra de tumor ovárico y picarla en trozos pequeños. Transfiera los trozos picados a un tubo que contenga un tampón de digestión complementado con la enzima proteasa deseada.

Estas proteasas degradan las proteínas de la matriz extracelular dentro del tejido, liberando células EOC, eritrocitos y algunos fibroblastos disociados en suspensión.

Filtre la suspensión celular a través de un colador para separar las células individuales suspendidas de las piezas de tejido no disociadas. Centrifugar la suspensión para peletizar las células EOC, los eritrocitos y los fibroblastos. Deseche el sobrenadante que contiene enzimas.

Vuelva a suspender el gránulo celular en un medio de crecimiento epitelial y transfiéralo a una placa de cultivo. Incube el cultivo para permitir que las células EOC y los fibroblastos se adhieran a la base de la placa mientras los eritrocitos flotan en el medio.

Retire los eritrocitos suspendidos refrescando el medio. Con el tiempo, el medio facilita el crecimiento selectivo de células EOC sobre fibroblastos para formar una monocapa de células primarias de cáncer de ovario.

Recoja la muestra del quirófano y transpórtela en hielo al laboratorio. Aún dentro del contenedor transportado, coloque la muestra en una campana de seguridad biológica. Transfiera la muestra de un tubo cónico de 50 mililitros a una placa de Petri de 60 milímetros por 60 milímetros que contenga 10 mililitros de PBS fresco helado.

A continuación, con una cuchilla de afeitar estéril, corte la muestra en trozos de 2 milímetros o más pequeños. Luego, trate DMEM con dispasa II en un tubo cónico de 15 mililitros. Transfiera los tejidos picados al tubo de mezcla de DMEM dispasa II. Luego, incube la muestra al 5% de dióxido de carbono y 37 grados Celsius durante 30 minutos. Agite manualmente la suspensión celular cada cinco minutos para garantizar una digestión óptima.

Después de la incubación, transfiera la lechada celular a través de un colador celular de malla de 70 micrómetros colocado encima de un tubo cónico de 50 mililitros. Aplique presión suavemente contra la malla con un émbolo de jeringa. Deseche cualquier tejido no disociado que quede en la parte superior de la malla y recoja la suspensión celular obtenida en el tubo cónico estéril de 50 mililitros.

A continuación, centrifugar el tubo cónico a 320 x g durante siete minutos a 4 grados centígrados. Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el sedimento celular en 10 mililitros de DMEM que contengan 10% de FBS y 1% de PS. Luego, transfiera la suspensión celular a una placa de Petri e incube la suspensión al 5% de dióxido de carbono y 37 grados Celsius. Cambie el medio 24 horas después de la siembra inicial para eliminar los restos celulares y la mayoría de los eritrocitos presentes en el cultivo.

Finalmente, cambie el medio cada tres días durante las siguientes dos semanas, después de lo cual los cultivos de células EOC primarias están listos para aplicaciones posteriores.

• Ovarian Tumor Sample - The tissue of origin from an ovarian tumor, used for lab analysis.
• Epithelial Ovarian Tumor Sample - A subtype of ovarian tumor sourced from epithelial cells.
• Ovarian Cancer Sample - Biopsy or excision sample of an ovarian malignant growth.
• DMEM - Standard cell culture medium used for growing mammalian cells.
• FBS - Fetal Bovine Serum, a supplement used in cell cultures to promote growth and survival.

• Introduce Ovarian Tumor Sample – The sample retrieved from patients, used for cellular analyses (e.g., epithelial ovarian tumor sample).
• Key Concepts – Overview of sample processing techniques (e.g., mincing, digestion).
• Underlying Mechanisms – Dissecting the biochemical processes during sample handling, e.g., enzymatic digestion and cell plating.
• Connect to Experiment – The cultivation of epithelial ovarian cancer cells paves the way for further cancer research.

• What is an ovarian tumor sample and how to process it?
• How does the sample processing facilitate downstream applications?
• Why does cell slurry need to be strained and centrifuged?

• Practical Applications – Ovarian cancer research and possible therapeutic development (e.g., drug screening).
• Industry Impact – Used in biomedical research and pharmaceutical industry (e.g., cancer drug development).
• Societal Importance – Advances in ovarian cancer treatment can increase survival rates (e.g., patient prognosis).
• Link to scientific Advancements – Adoption of this methodology contributes to cancer research advancements.