Name: Heterotípicos tridimensional In Vitro Modelado de estromal-epitelial interacciones durante la iniciación y progresión del cáncer de ovario (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 42 s
Description: Aprende a generar modelos tridimensionales heterotípicos de cáncer de ovario en etapas tempranas mediante co-cultivo de células epiteliales y fibroblastos estromales. Esta técnica permite estudiar las interacciones estromal-epiteliales que influyen en la progresión tumoral.

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Esta investigación se realizó en la Escuela Keck de Medicina de la Universidad de California, EE.UU., y la Universidad College de Londres, Reino Unido. KL es financiado por el Instituto Nacional de Salud de subvención U19 5 CA148112-02. BG fue financiado por una subvención para el proyecto de la caridad Apelaciones Eva oncología ginecológica (Reino Unido). Parte de este trabajo realizado en UCLH / UCL fue en parte la financiación del Departamento de Salud NIHR esquema de financiación, el Centro de Investigación Biomédica.

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</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

La biología de las primeras etapas del cáncer de ovario epitelial (EOC) es poco conocido. Quizás uno de los impedimentos principales en este campo durante muchos años ha sido la falta de comprensión de los orígenes de tejidos específicos de la enfermedad, y de la importancia del papel del microentorno en el desarrollo de EOC. Durante los últimos años, se ha hecho evidente que EOC es una enfermedad heterogénea con múltiples subtipos distintos histophathological, probablemente con diferentes orígenes celulares para difere...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reactivo </td><td> Proveedor </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> PoliHEMA, adecuado para el cultivo de células </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> La biología molecular etanol de grado </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> Agua estéril para cultivo de células </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> Medio 199 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Suero bovino fetal Hyclone </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;td&gt; Gentamicina </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> La anfotericina B </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-hygro-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0,25% de tripsina-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> Celular colador (40 o 70 micras) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> Anti-anticuerpo de superficie de fibroblastos de proteína, el clon 1B10 </td><td> Sigma </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> Anti-pan-citoqueratina de anticuerpos (C11) </td><td> Santa Cruz </td><td> sc-8018 </td></tr><tr><td> Polibreno (bromuro de hexadimetrina) </td><td> Sigma </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG telomerasa PCR ELISA PLUS </td><td> Roche </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Ensayo longitud del telómero </td><td> Roche </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> Reactivos Tabla 1. Y el equipo contemplados en este estudio.

heterotípicos tridimensional<em&gt; in vitro</em&gt; modelado de estromal-epitelial interacciones durante la iniciación y progresión del cáncer de ovario

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Cánceres epiteliales de ovario (EOC) son la principal causa de muerte por neoplasia ginecológica en las sociedades occidentales. A pesar de los avances en los tratamientos quirúrgicos y mejores quimioterapias a base de platino, ha habido pocas mejoras en las tasas de supervivencia COE durante más de cuatro décadas 1,2. Mientras que los tumores en estadio I tienen 5 años las tasas de supervivencia&gt; 85%, las tasas de supervivencia para el estadio III / IV de la enfermedad son &lt;40%. Así, las altas tasas de mortalidad por EOC podría disminuir significativamente si los tumores se detectan en las primeras y más tratables, etapas 3-5. En la actualidad, la base genética molecular y biológica de la enfermedad en etapa temprana de desarrollo se entiende poco. Más específicamente, se sabe poco sobre el papel de la microambiente durante la iniciación del tumor, pero los factores de riesgo conocidos para los EOC (por ejemplo la edad y la paridad) sugieren que el microambiente juega un papel clave en la génesis temprana de EOC. Por lo tanto, desarrollado modelos tridimensionales heterotípicastanto del ovario normal y de las primeras etapas de cáncer de ovario. Para el ovario normal, co-cultivadas superficie epitelial ovárico normal (pierdes) y fibroblastos normales del estroma (INOF) las células, inmortalizada por la transducción retrovrial de la subunidad catalítica de la telomerasa humana holoenzyme (hTERT) para extender la vida útil de estas células en cultivo. Para modelar las primeras etapas de transformación de la célula epitelial de ovario, la sobreexpresión del oncogén cmyc en células Iosé, de nuevo co-cultivadas con células INOF. Estos modelos heterotípicas se utilizaron para investigar los efectos del envejecimiento y la senescencia en la transformación y la invasión de las células epiteliales. Aquí se describen los pasos metodológicos en el desarrollo de estos modelo tridimensional; estas metodologías no son específicos para el desarrollo de ovario normal y tejidos de cáncer de ovario, y podría ser utilizado para estudiar otros tipos de tejido, donde las interacciones de células estromales y epiteliales son un fundamental aspecto del mantenimiento del tejido y dimedad desarrollo.

Se describen las metodologías para el establecimiento de<em&gt; In vitro</em&gt; Heterotípicas modelos tridimensionales que comprenden fibroblastos de ovario y de superficie ovárica normal o células de cáncer de ovario epiteliales. Se discute el uso de estos modelos para estudiar estromal-epitelial interacciones que se producen durante el desarrollo de cáncer de ovario.

Heterotípicos tridimensional<em&gt; In Vitro</em&gt; Modelado de estromal-epitelial interacciones durante la iniciación y progresión del cáncer de ovario

Los cánceres epiteliales de ovario (CEO) son la principal causa de muerte por neoplasias ginecológicas en las sociedades occidentales. A pesar de los avances en la cirugía...

El objetivo general del siguiente experimento es generar modelos tridimensionales típicos del desarrollo del cáncer de ovario en estadios iniciales. Primero, genere líneas celulares inmortalizadas H turt derivadas de tejidos epiteliales ováricos normales primarios y de fibroblastos. Luego, para recrear la arquitectura in vivo y las complejas interacciones célula-célula presentes en el ovario, realice un cultivo conjunto de líneas celulares epiteliales y estromales en modelos de esferoides tridimensionales, proceda a fijar y teñir los cultivos de organoides y analice la expresión de marcadores específicos con el fin de estudiar las características moleculares de las interacciones estromal-epiteliales.Los resultados obtenidos muestran cómo las alteraciones en el compartimento de células estromales de modelos tridimensionales típicos pueden influir en el fenotipo de las células epiteliales cultivadas conjuntamente. Los modelos tridimensionales típicos pueden ayudar a responder preguntas clave en el campo de la investigación del cáncer ovárico, como explorar los orígenes de esta enfermedad y esclarecer el papel del microentorno estromal en la iniciación y el desarrollo tumoral. Las apl

heterotypic-three-dimensional-vitro-modeling-stromal-epithelial

Research

Investigación

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Medicine

Medicina

El ensayo de depuración mesotelial se describe aquí se aprovecha de las células de la etiqueta fluorescente y time-lapse microscopía de vídeo para visualizar y medir cuantitativamente las interacciones de los esferoides multicelulares de cáncer de ovario y monocapas de células mesoteliales. Este ensayo permite simular las primeras etapas de la metástasis del cáncer de ovario.

Ensayo in vitro Liquidación mesoteliales que modela los pasos iniciales de la metástasis del cáncer ovárico

En este video, demostramos el desarrollo de un modelo tridimensional in vitro del revestimiento de la cavidad peritoneal. Este cultivo organotípico puede ayudar a investigar la adhesión, invasión y proliferación de las células de cáncer de ovario.

Modelado de la metástasis del cáncer de ovario en el revestimiento de la cavidad peritoneal: un método para establecer un modelo 3D in vitro del revestimiento peritoneal

Aquí presentamos un protocolo para el cocultivo en tres dimensiones, que es útil para investigar las interacciones multicelulares y la modulación dependiente de la matriz extracelular del comportamiento de las células cancerosas. En este modelo experimental, las células cancerosas se cultivan en geles de colágeno incrustados con fibroblastos asociados al cáncer humano.

Tridimensional Modelo Co-cultura para la interacción tumor estromal

Aquí, presentamos un protocolo para construir un modelo tridimensional in vitro del revestimiento de la cavidad peritoneal, compuesto por células mesoteliales humanas primarias y fibroblastos estratificados con matriz extracelular, como herramienta para investigar la adhesión, invasión y proliferación de las células de cáncer de ovario.

Modelado de los primeros pasos de cáncer de ovario Difusión en una cultura organotípicos del Peritoneal Cavity Humano

Demostramos un método para generar sustitutos de cáncer de mama en 3D, que se pueden cultivar utilizando un sistema de biorreactor de perfusión para suministrar oxígeno y nutrientes. Después del crecimiento, los sustitutos se fijan y se procesan en parafina para la evaluación de los parámetros de interés. Se explica la evaluación de uno de estos parámetros, la densidad de celdas.

Preparación y análisis de<em&gt; In Vitro</em&gt; Tres de mama Carcinoma de dimensiones Surrogates

Para estudiar la progresión del tumor de ovario en un modelo fisiológicamente relevante, esferoides multicelulares se cultivaron en un microdispositivo bajo un flujo de fluido simulado. Este modelo 3D dinámico emula el medio ambiente intraperitoneal con los componentes celulares y mecánicas donde se produce la metástasis del cáncer de ovario.

Modelización del comportamiento del cáncer de ovario en un esferoide multicelular Microdevice 3D dinámico peritoneal

Las células madre del cáncer de ovario (OCSC) son responsables de la iniciación, recurrencia, resistencia terapéutica y metástasis del cáncer. Se considera que el nicho vascular OCSC promueve la autorrenovación de las OCSC, lo que lleva a la quimiorresistencia. Este protocolo proporciona la base para establecer un modelo de nicho vascular OCSC reproducible in vitro.

Evaluación de las propiedades angiogenéticas de las células madre similares al cáncer de ovario utilizando el sistema de cocultivo tridimensional, NICO-1

Este protocolo describe el establecimiento de un modelo ex vivo tridimensional (3D) de la interacción entre la célula cancerosa y el epiplón. El modelo proporciona una plataforma para dilucidar los mecanismos protumorales dentro del nicho adiposo y para probar nuevas terapias.

Un modelo ex vivo de metástasis peritoneal de cáncer de ovario con epiplón humano

Existe una necesidad crítica de modelos de cáncer en 3D que capturen la diafonía heterocelular para estudiar la metástasis del cáncer. Nuestro estudio presenta la generación de estromas-epiteliales heteromulticelulares en un entorno de andamios y libres de andamios que pueden ser utilizados para estudiar la invasión y las distribuciones espaciales celulares.

Células estromales heteromulticelulares en cultivos 3D sin andamios de células de cáncer epitelial para impulsar la invasión

Este protocolo detalla el desarrollo de modelos de ratón de carcinoma de ovario seroso de alto grado (HGSOC) in vitro e in vivo. A partir de la derivación de organoides de trompas de Falopio murinos, su modificación genética para recapitular la genética HGSOC humana y su introducción en la bolsa ovárica de ratones singénicos para el desarrollo in vivo de tumores.

Desarrollo de líneas de organoides derivados de ratones a partir de células epiteliales de trompas de Falopio para el modelado de carcinoma de ovario seroso de alto grado

Aprende a generar modelos tridimensionales heterotípicos de cáncer de ovario en etapas tempranas mediante co-cultivo de células epiteliales y fibroblastos estromales. Esta técnica permite estudiar las interacciones estromal-epiteliales que influyen en la progresión tumoral.

Heterotípicos tridimensional In Vitro Modelado de estromal-epitelial interacciones durante la iniciación y progresión del cáncer de ovario (Video) | JoVE Journal

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