Detección de splicing alternativo Durante epitelial-mesenquimal de transición

El objetivo general del siguiente experimento es detectar cambios en el empalme alternativo durante la EMT. Esto se logra mediante la utilización de un modelo EMT inducible en el que la expresión de la proteína de fusión retorcido er. En las células epiteliales mamarias humanas, las células se someten a EMT tras el tratamiento con tamoxifeno como segundo paso.

La expresión de las isoformas de empalme se analiza mediante R-T-P-C-R cuantitativo utilizando conjuntos de cebadores específicos de isoformas, lo que revela cambios de empalme alternativos a nivel de ARN. A continuación, se determina la abundancia de proteína correspondiente a cada isoforma mediante inmuno transferencia con el fin de confirmar la expresión de isoformas de empalme a nivel de proteína, se obtienen resultados que muestran cambios en el splicing alternativo en genes de interés durante la EMT, basados en análisis cuantitativos de R-T-P-C-R e inmuno transferencia, Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del empalme alternativo de RN y EMT, por ejemplo, cómo se regula el empalme alternativo durante la EMT y cómo esta regulación afecta a la EMT y a los procesos patológicos relacionados con la EMT. Las implicaciones de esta técnica son favorables a la terapia del cáncer, ya que la EMT desempeña un papel importante en la promoción de la invasión tumoral y la metástasis.