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DOI: 10.3791/57889-v
Xuan Guo1,2, Yiqing Zhao1,3, Hieu Nguyen1, Tonghua Liu2, Zhenghe Wang1,3, Hua Lou1,3,4
1Department of Genetics and Genome Sciences,Case Western Reserve University, 2Department of Endocrinology,Dongfang Hospital of Beijing University of Chinese Medicine, 3Case Comprehensive Cancer Center,Case Western Reserve University, 4Center for RNA Science and Therapeutics,Case Western Reserve University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Se describe un protocolo en situ hibridación (ISH) que utiliza oligonucleótidos antisentidos corto para detectar patrones de splicing alternativo del pre-mRNA en secciones de cerebro de ratón.
Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del empalme alternativo de pre-ARNm. En concreto, proporciona un sistema de ensayo robusto y sensible para examinar patrones de empalme alternativos in situ en cortes de tejido. Con este método, el empalme alternativo se puede analizar simultáneamente en muchos subtipos que están contenidos en estructuras biológicas complejas, como el cerebro de un ratón.
La principal ventaja de esta técnica es que utiliza sondas de unión de exones antiestáticas de choque en la hibridación in situ de ARNm para producir señales de hibridación específicas de isoformas. La tecnología de amplificación de señal de construcción aumenta la sensibilidad de la detección para proporcionar señales de hibridación robustas. La señal detectada fue la inclusión de exones que escapó de sondas específicas que se utilizan para calcular el porcentaje de empalme en los signos vitales en diferentes áreas anatómicas del cerebro de un ratón.
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