Ligadura Altamente Eficiente de los Pequeños ARN moléculas de microARN cuantificación mediante secuenciación de alto rendimiento

El objetivo general de este procedimiento es preparar de forma imparcial los microARN para la secuenciación de alto rendimiento. Esto se logra preparando o comprando primero oligonucleótidos de ADN que son competentes para la ligadura a los tres extremos principales del micro ARN. El segundo paso es ligar los tres oligonucleótidos principales del ADN a los tres extremos principales del micro ARN.

A continuación, el producto de ligadura se purifica en gel y el enlazador de oligonucleótidos de ARN de cinco primos se liga al extremo de cinco primos del micro ARN. El paso final es convertir las moléculas híbridas en CDNA y luego amplificar el CDNA mediante la reacción en cadena de la polimerasa. En última instancia, la clonación de microARN y la secuenciación de alto rendimiento se utilizan para mostrar el perfil amplio del transcriptoma de los microARN de forma cuantitativa con una resolución de nucleótidos individuales.