Las técnicas para Ojos Procesamiento implantados con una retina Prótesis para análisis histopatológico localizado: Parte 2 Epirretinal Implantes de retina con tachuelas

Las prótesis de retina con componentes metálicos duros no son compatibles con los procesos histológicos tradicionales. Aquí describimos técnicas para evaluar la salud del ojo directamente adyacente a un implante de retina epiretinal asegurado con una T de metal. Esto se logra primero nucleando y fijando el ojo de acuerdo con el protocolo descrito en un video complementario, y luego diseccionando una muestra de tejido, que incluye el implante y la T de retina. El segundo paso es deshidratar progresivamente la muestra de tejido y luego incrustarla en una resina epoxi en la orientación deseada mediante un proceso de incrustación de dos pasos. A continuación, el bloque de resina final se monta en un soporte especial y se muele gradualmente hasta que una sección transversal a través del implante y el tejido ocular circundante queda expuesta al nivel deseado.

El paso final es teñir la superficie del tejido expuesto, y luego obtener imágenes y fotografías con un microscopio de disección de alta potencia para visualizar la arquitectura celular adyacente a la prótesis implantada. Estos pasos se repiten varias veces según sea necesario. En última instancia, se recopila una serie de imágenes transversales a través de la muestra de tejido, incluido el implante in situ, que pueden utilizarse para refinar el diseño del dispositivo o la cirugía, así como para ayudar a evaluar la seguridad de la prótesis en particular.

La principal ventaja de esta técnica sobre los métodos existentes, como la histología tradicional de corte basada en cuchillas, es que los objetos implantados en el corazón, incluidos los componentes metálicos, pueden permanecer in situ durante el procedimiento, lo que permite la visualización de la interfaz del tejido del implante. Este método puede responder a preguntas clave en el campo de las prótesis de retina, como la evaluación de la integridad estructural del delicado tejido ocular adyacente a una prótesis de retina implantada. Después de la enucleación del ojo y la fijación, como se describe en un video complementario de JoVE, visualice el implante y el punto donde se asegura al exterior del ojo.

Usando una cuchilla de 15 grados. Haga una incisión transcorneal circunferencial y retire la tapa corneal para revelar el interior del globo ocular. Tenga en cuenta que el cristalino se ha extraído previamente durante la vitrectomía con lensectomía, que forma parte del procedimiento quirúrgico de este implante epirretiniano.

A continuación, desinvestigue, inserte el iris y las fibras Z residuales del cristalino para revelar la cámara posterior con el implante epirretiniano y la T metálica in situ. Dependiendo del implante y del estudio que se esté realizando, extraiga los componentes extraños antes de continuar con la disección. En el presente ejemplo, la matriz epirretiniana que se está evaluando consiste en un prototipo hermético, un electrodo de diamante y un paquete electrónico alojado dentro de un soporte de silicona conformado.

Diseccione cuidadosamente una muestra que incluya la tachuela y el tejido circundante en la orientación deseada. Use tijeras de disección finas para cortar tiras de grosor completo de la parte posterior del ojo, incluidas la esclerótica, la coroides y la retina. Aquí, extraiga cuidadosamente el paquete de electrodos de diamante mediante una disección fina con el bisturí.

Deje el cuerpo de silicona del implante junto con la tachuela de la retina y los restos del cableado de platino. Tome una muestra que dé una sección transversal longitudinal de la tachuela, mostrando todas las capas de la retina adyacentes a la tachuela. A continuación, devuelva la muestra a etanol al 70%.

Deshidratar la muestra durante tres días en etapas progresivas de etanol. Primero, deshidrate la muestra en etanol al 70% durante dos horas, dos veces. A continuación, deshidrate la muestra en etanol al 80% durante dos horas dos veces, y luego, durante la noche del día siguiente, deshidrate la muestra en etanol al 90% durante dos horas dos veces, proceda a deshidratar la muestra en etanol al 100% durante dos horas dos veces y luego durante la noche.

Finalmente, deshidrate la muestra en acetona al 100% durante dos horas dos veces. Retire la muestra de la acetona y obsérvela bajo un microscopio óptico mientras se seca al aire a temperatura ambiente. La eliminación del líquido de los tejidos blandos provoca el colapso y la contracción de las células.

La muestra se transferirá a epoxi justo antes de que comience a curvarse y colapsar. Con la experiencia se desarrolla una apreciación de cuándo se produce el enroscamiento y el colapso del tejido. Para incrustar la muestra en resina epoxi transparente, sumerja el tejido ocular en epoxi licuado en un recipiente hermético adecuado.

Desgasifica suavemente el epoxi en una cámara de vacío y déjalo toda la noche a temperatura ambiente para que se seque. Tenga cuidado de incrustar la muestra en la orientación deseada cambiando el tamaño del epoxi curado y la muestra con una sierra de cinta y una caña El bloque redimensionado que contiene el tejido ocular en epoxi licuado fresco de modo que el eje largo de la tachuela esté orientado paralelamente al fondo del molde. Use un punto de superpegamento para asegurar la muestra de cambio de tamaño a la parte inferior del portamuestras.

Llene el portamuestras con epoxi licuado y desgasifique como antes, deje curar durante la noche. A continuación, monte la resina en un soporte de muestras de molienda y muela manualmente la muestra a 230 a 250 RPM con el agua puesta con papel de carburo de silicona. Para teñir, sumerja la superficie del suelo en tinte azul toine durante tres a cinco minutos o hasta que se desarrolle la mancha.

Después de enjuagar la muestra con agua del grifo, obtenga una imagen de la superficie molida de la muestra con una disección de mayor potencia. Alcance. Para visualizar las capas celulares de la retina, aplique una gota de agua destilada en la superficie superior del epoxi justo encima de la muestra. Para suavizar la difracción en la interfaz de epoxi de aire.

Utilice una fuente de luz de cuello de cisne de fibra óptica para iluminar la muestra. Repita los pasos de molienda y obtención de imágenes cada vez que muela un espesor preestablecido de muestra. El incremento mínimo de molienda preciso y reproducible del portamuestras es de 20 micras.

Este proceso se repite de forma incremental hasta que una sección transversal a través del implante y el tejido ocular circundante queda expuesta al nivel deseado. Mostrado. A continuación, se muestran imágenes de ejemplo de tejido retiniano visualizado inmediatamente adyacente a una T retiniana de titanio en varios puntos durante el proceso de molienda. Las imágenes muestran secciones longitudinales de la tachuela que penetran a través del ojo y salen de la esclerótica adyacente a la retina teñida y sin teñir de silicona y azul de toluidina.

Se puede ver un desprendimiento y plegamiento de retina no artefactual a ambos lados de la silicona tanto a baja como a alta potencia. El eje de la tachuela es visible incrustado en silicona, y la cabeza de la tachuela ha penetrado en la retina y la esclerótica. Aquí es evidente que hay un desprendimiento de retina no artefactual en la retina no teñida a ambos lados de la silicona visualizada tanto a baja como a alta potencia.

El ejemplo ha demostrado que hay una desorganización de la retina adyacente a la tachuela y compresión de la retina en un lado debido a un ángulo de inserción oblicuo. Al intentar este procedimiento, es importante recordar incrustar, orientar y regar la muestra con cuidado, de modo que las superficies del suelo resultantes se alineen en el plano deseado. Además, se deben recopilar varias fotografías en cada etapa de molienda, ya que las muestras molidas no se pueden recuperar hoy en día.

Este método puede proporcionar información sobre la histología de las prótesis de retina. También se puede aplicar para visualizar la interfaz tisular del dispositivo en otros sistemas que utilizan componentes duros implantados, como implantes cerebrales profundos, stents vasculares o prótesis ortopédicas.