Generación eficiente de hiPSC Neuronales Lineage Reporteros Knockin concreto utilizando la CRISPR / Cas9 y Cas9 Doble Sistema Nickase

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28 de mayo de 2015

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Las herramientas de edición del genoma, como el sistema CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)/Cas (CRISPR-associated), han mejorado en gran medida la eficiencia de la selección de genes en células madre pluripotentes inducidas humanas (hiPSC). Este manuscrito describe un protocolo para generar un indicador de hiPSC específico del linaje utilizando la recombinación homóloga asistida por el sistema CRISPR/Cas.

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Generación de reporteros mediante knock-in

Chapters in this video

0:05

Título

1:54

Diseño de vectores de direccionamiento

2:41

Diseño y construcción de vectores de sgRNA para el sistema CRISPR/Cas9

5:20

Diseño y construcción de sgRNA para la doble nickasa Cas9n

8:06

Evaluación de sgRNA mediante la endonucleasa T7 1

11:03

Predicción in silico de posibles sitios fuera de objetivo

12:32

Resultados: el ensayo T7E1 se utiliza para evaluar los sgRNA antes de la transfección de hiPSC

13:56

Conclusión

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