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Multiwell Rigidez Ensayo para el Estudio de las respuestas de las células Rigidez dependientes si...
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JoVE Journal Bioengineering
Simple Polyacrylamide-based Multiwell Stiffness Assay for the Study of Stiffness-dependent Cell Responses

Multiwell Rigidez Ensayo para el Estudio de las respuestas de las células Rigidez dependientes simple basado poliacrilamida-

Full Text
20,737 Views
07:45 min
March 25, 2015

DOI: 10.3791/52643-v

Sana Syed1, Amin Karadaghy1, Silviya Zustiak1

1Biomedical Engineering Department,Saint Louis University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Aquí, se describe un método que permite la preparación rápida, eficiente y económica de geles de poliacrilamida en un formato de placa multipocillo. El método no requiere ningún equipo especializado y podría ser fácilmente adoptado por cualquier laboratorio de investigación. Sería particularmente útil en investigaciones centradas en la comprensión de las respuestas celulares dependientes de la rigidez.

El objetivo general de este procedimiento es permitir una preparación rápida, eficiente y económica de geles de poliacrilamida en un formato de placa de pocillos múltiples. Esto se logra intercalando primero, la solución precursora de gel entre una placa de vidrio con recubrimiento hidrofóbico y un soporte de plástico flexible adhesivo de acrilamida. El segundo paso es despegar el gel de la placa de vidrio, que se ha adherido covalentemente al soporte de plástico flexible tras la polimerización y dejarlo secar.

A continuación, el gel seco y el soporte de plástico flexible subyacente se cortan en las formas deseadas y se pegan con el lado del plástico hacia abajo a los fondos de los pocillos de una placa de pocillos múltiples o cualquier otro recipiente de cultivo celular. El paso final es recubrir los geles de poliacrilamida ensamblados en placas de varios pocillos con un recubrimiento adhesivo celular, como una monocapa de colágeno tipo uno. En última instancia, la microscopía, así como otras técnicas de caracterización celular, se utilizan para observar el efecto del sustrato subyacente de poliacrilamida.

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