Puesta a punto del paralelo Columna de flujo segmentado y habilitación de detección de multiplexado

El objetivo general de este procedimiento de HPLC es ajustar una columna de flujo segmentada en paralelo para permitir la detección múltiple. Este método responde a preguntas clave en las áreas de salud y bienestar, ciencias ambientales, medicina forense y cualquier área que requiera el análisis de muestras complejas, como el biodescubrimiento. Esta técnica permite el análisis exhaustivo de las muestras y, al mismo tiempo, proporciona información sobre la naturaleza química y bioactiva de las sustancias en mezclas complejas.

Los protocolos de detección múltiple también permiten un análisis rápido. Este método permite el desarrollo de estrategias para definir la huella química de mezclas complejas, como el café y el vino, lo que permite a los fabricantes diferenciar entre sus productos y las variedades falsificadas baratas. Inicialmente, puede parecer poco ortodoxo no enviar toda la muestra a un solo detector para un análisis preciso.

Sin embargo, la concentración de analito dentro de cada corriente de flujo es mayor que la corriente de flujo total de una columna convencional. Para empezar, configure el instrumento de HPLC con agua 100% UE y metanol puro para las fases móviles A y B respectivamente. Si se va a utilizar un detector de MS, añada ácido fórmico al 0,1% a ambas fases móviles y, a continuación, purgue las bombas de HPLC de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Montar el MS UV VS. Y detectores DPPH. Según las instrucciones del fabricante. Asegúrese de que los componentes estén dispuestos correctamente, de modo que el volumen muerto en las líneas del detector sea mínimo.

A continuación, ajuste la longitud de onda del detector UV VISTA a la longitud de onda específica de la muestra aquí. 280 nanómetros para el detector MS. Utilice el modo positivo para el recuento total de iones o el análisis de tics con el método de detección de escaneo completo.

Equilibre la temperatura y el flujo de gas del detector MS a los siguientes valores. Temperatura del vaporizador de 500 grados Celsius, temperatura capilar de 350 grados Celsius, flujo de gas auxiliar de 40 unidades, flujo de gas de barrido de cinco unidades, tasa de gas de la vaina de 60 unidades y voltaje de pulverización de 3,5 kilovoltios. Para preparar el reactivo de radical DPPH, comience disolviendo 25 miligramos de radical DPPH en 250 mililitros de metanol en un matraz aforado.

Agregue 250 microlitros de ácido fórmico a la solución y sonique la solución durante 10 minutos. A continuación, cubra el matraz y el papel de aluminio para evitar la exposición a la luz. A continuación, purgue la bomba con la solución de radicales DPPH según lo aconsejado por el fabricante para configurar el sistema de radicales DPPH.

Asegúrese de que la línea de la bomba esté sujeta a la entrada de una pieza T y luego conecte la bobina de reacción de 100 microlitros a la salida de la pieza T. Conecte el detector al otro extremo de la caja ENC de la bobina de reacción, la bobina de reacción y un calentador de columna. Finalmente, configure el detector de radicales UV V DPPH a 520 nanómetros.

Para construir el flujo segmentado paralelo o la columna PSF, primero conecte la entrada de la columna al instrumento HPLC. A continuación, utilice un trozo de tubo para conectar el puerto central al detector MS. Utilice tubos de las mismas dimensiones para conectar un puerto de columna periférica al detector UV VS y otro a la pieza T del sistema de detección de radicales DPPH.

Bloquee los puertos periféricos no utilizados con topes de columna. Ajuste el caudal de la HPLC a un mililitro por minuto de fase B 100% móvil para una columna de 4,6 milímetros, diámetro interno y 250 milímetros de longitud. Equilibra durante 20 minutos.

Para comenzar a ajustar el sistema PSF, primero rasgue para vaciar los recipientes de recolección. Utilice estos viales para recoger por separado la fase móvil del UV VS. Y puertos radicales DPPH. Tenga en cuenta el período de tiempo de recolección y recoja al menos 500 miligramos de solvente en cada recipiente.

A continuación, pese los recipientes de recolección para determinar la masa de la fase móvil y divida la masa por la densidad del metanol para calcular el volumen de la fase móvil recolectada de cada puerto. Finalmente, determine el caudal al detector MS y calcule las proporciones de flujo de todos los detectores como un porcentaje del flujo total según lo atribuido en el protocolo de texto. Si las proporciones de flujo se desvían sustancialmente de los valores ideales, agregue tubería adicional donde sea necesario para ajustar la contrapresión y repita el proceso de recolección y cálculo.

Finalmente, configure el caudal de la bomba de reactivo radical DPPH para que coincida con el caudal del puerto de salida conectado al detector. Se realizó un análisis de HPLC multiplexado en una muestra de café. La capacidad de registrar DPPH radical UV VS. Y los cromatogramas Ms. simultáneamente permiten que los compuestos de la muestra que respondieron positivamente al radical DPPH se adapten fácilmente a las respuestas UV frente a

MS en función de la alineación del tiempo de retención donde se observó una respuesta positiva del detector MSS TIC, se registró la masa molecular del pico. La facilidad para hacer coincidir los picos entre los diferentes procesos de detección permite una forma más rápida y eficiente de cribado y caracterización de una muestra compleja como el café Una vez dominada, esta técnica puede configurarse en solo una hora y estar lista para el análisis de muestras siguiendo este procedimiento. Se pueden utilizar otros detectores, como el índice de refracción, la fluorescencia y la detección química, como la luminiscencia química, para obtener información adicional de la muestra.

Después de ver este video, debe reconocer la importancia de los procesos de detección de multiplexación para obtener una mayor comprensión de una muestra compleja. Además, la detección múltiplex mediante columnas de flujo segmentadas en paralelo es una forma extremadamente eficiente de llevar a cabo la bioexploración.