Espectroscopia óptica difusa para la evaluación cuantitativa de la radiación ionizante aguda La toxicidad cutánea inducida utilizando un modelo de ratón

El objetivo general de esta técnica de espectroscopia óptica difusa es desarrollar un biomarcador cuantitativo para describir el eritema agudo inducido por radiación. Este método se puede utilizar en el campo de la radioterapia como biomarcador predictivo para identificar a los pacientes con riesgo de toxicidad cutánea grave por radiación. Por lo tanto, la principal ventaja de esta técnica es que proporciona una métrica objetiva y sistemática para cuantificar las toxicidades cutáneas por radiación.

Yo demostraré la técnica de espectroscopia óptica difusa, y Elina, investigadora del Loo Lab, se encargará de los ratones. Encienda la electrónica y permita que el sistema arranque. A continuación, apague todas las luces fluorescentes de la habitación y coloque las luces incandescentes a una distancia del dispositivo de medición para proporcionar una iluminación de trabajo.

A continuación, configure el instrumento para tomar medidas de la piel del ratón. Ajuste los parámetros de la señal de la siguiente manera. Establezca el tiempo de recolección en 25 milisegundos, establezca los promedios de señal en 25 y establezca el ancho del filtro del vagón en uno.

Estos parámetros ofrecen un equilibrio razonable entre el tiempo de adquisición y la relación señal-ruido. A continuación, utilizando el software de adquisición programado personalizado, adquiera automáticamente una lectura de fondo con el LED apagado. A continuación, adquiera una lectura con reflectancia difusa a dos distancias de separación del detector de fuentes.

Tome una medida a 260 micras y la segunda a 520 micras. El tiempo de adquisición en total debe ser de unos dos segundos. Después de anestesiar el ratón, muévalo al área de sondaje DOS esterilizada.

Colóquelo de lado y asegure su hocico a un cono de nariz que suministre gas isoflurano al 2% para mantener la anestesia. Ahora esterilice la sonda con etanol al 70%, pero no intente esterilizar la piel. Sostenga la sonda esterilizada suavemente sobre la piel del flanco.

No presione demasiado, ya que la vasculatura local no debe ser dispersada por la presión de la sonda. Mientras sostiene la sonda, adquiera datos de reflectancia en el área cuadrada de dos centímetros que se va a irradiar. Recopile datos en una formación de cinco puntos como en un dado.

Mantenga este patrón y la presión de sondeo consistentes en todas las mediciones posteriores. Después de realizar las mediciones, coloque el ratón en una jaula de recuperación. Mientras el mouse se recupera, repita el procedimiento en el siguiente mouse.

Este procedimiento se adapta al irradiador disponible. Ajústalo según sea necesario para irradiar una pequeña sección de piel. Después de anestesiar a un ratón, pellizca suavemente un poco de piel en su flanco y pega la piel estirada para formar una solapa.

A continuación, coloque el ratón sobre una plataforma de plexiglás y cubra su cuerpo con una plantilla de plomo personalizada. Use una caja de plomo que sea accesible por dos lados y que tenga una ventana para que la piel sea irradiada. A continuación, tira de la solapa de piel a través de la ventana de la plantilla y pega la solapa al escenario.

Si el ratón no está inmovilizado por la plantilla, aplícale una inyección anestésica. A continuación, coloque la platina con la plantilla y el ratón en el irradiador. Calcule la dosis de irradiación requerida.

Por ejemplo, una fuente de rayos X de 160 kilovoltajes máximos colocada a 11 centímetros de distancia irradiaría adecuadamente la piel funcionando a 6,3 miliamperios durante 2,5 minutos. A continuación, administre la dosis calculada. Después de dosificar al animal, devuélvalo a una jaula de recuperación.

Una vez recuperado de la anestesia, regrese al ratón a su jaula de alojamiento compartida normal. Los ratones fueron irradiados y medidos como se describe. Antes de la irradiación, se tomó un espectro de referencia con una separación de fuente de 260 micras en un modelo de piel de ratón atímico.

La línea verde gruesa muestra un ajuste matemático de la línea azul delgada. En comparación con las mediciones realizadas seis días después de una irradiación de 40 grises, se observaron diferencias en la forma espectral entre 550 y 600 nanómetros, probablemente debido a un aumento de la hemoglobina oxigenada. También se observa un pequeño aumento en la reflectancia absoluta, y puede estar correlacionado con un aumento en el poder de dispersión del tejido.

Los datos ajustados devuelven biomarcadores ópticos cuantitativos que se pueden rastrear en función del tiempo posterior a la irradiación. Por ejemplo, las mediciones de la saturación de oxígeno en los tejidos aumentaron progresivamente después de la irradiación. Estos datos cuantitativos se correlacionaron con un grado visual de la toxicidad cutánea, que también aumentó progresivamente después de la irradiación.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo emplear la espectroscopia óptica difusa para la puntuación cuantitativa de las toxicidades cutáneas por radiación. Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en dos o tres minutos, si se realiza correctamente. Al intentar este procedimiento, es importante presionar suavemente la sonda DOS para evitar dispersar la vasculatura.

Esta técnica se puede utilizar en el campo de la radioterapia como una forma de vincular los parámetros fisiológicos para describir la respuesta normal de los tejidos a la radiación.