Termoestabilización, Expresión, purificación y cristalización del transportador de serotonina humano enlazado a

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27 de noviembre de 2016

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1Vollum Institute, Oregon Health & Science University, 2Graduate Group in Biophysics, University of California, San Francisco, 3Howard Hughes Medical Institute, Oregon Health & Science University

Este manuscrito describe cómo la pantalla para termoestabilizante mutaciones, purificar el transportador de serotonina humano, generar anticuerpos de alta afinidad, y cristalizar el complejo transportador de serotonina-anticuerpo unido a la antidepresivo fármaco S citalopram. Este protocolo puede ser adaptado para el estudio de otros transportadores desafiantes de membrana, receptores y canales.

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Unión de S-citalopram
expresión en baculovirus
células HEK293S
reconstitución en proteoliposomas
expresión de fragmentos de anticuerpos
cromatografía de exclusión molecular
cristalografía de rayos X
estabilización de proteínas de membrana

Chapters in this video

0:05

Título

0:47

Transfección de células adherentes HEK293S GnTI- para el cribado de termoestabilidad

2:24

Cribado de termoestabilidad basado en proximidad de centelleo con citalopram

4:18

Expresión del transportador de serotonina humano en células HEK293S GnTI-

5:24

Purificación por afinidad del transportador de serotonina para inmunización y cristalización

7:12

Formación de complejos transportador-anticuerpo y separación mediante cromatografía de exclusión molecular

8:21

Cristalización de complejos transportador-anticuerpo mediante el método de gota colgante

10:01

Resultados: Termoestabilización y cristalización del transportador de serotonina en estado unido a un antidepresivo

11:25

Conclusión

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