Modificación y funcionalización del grupo guanidina por Precursores adaptado

El objetivo general de este procedimiento es proporcionar un acceso sintético conveniente a los péptidos funcionalizados con guanidina. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la química de péptidos musculares, como el desarrollo de ligandos de integrinas o ligandos GPCR. La principal ventaja de esta técnica es que permite un acceso fácil y sintético a guanidinas funcionalizadas, completamente compatibles con SPPS.

La tecnología será especialmente valiosa para las moléculas táctiles porque los grupos funcionales, que se modifican, suelen ser biomoléculas en deterioro. En nuestro caso, nuestro objetivo es moléculas que puedan utilizarse para la obtención de imágenes moleculares de distintas propiedades de cánceres individuales y para su tratamiento específico; Un tema importante para la medicina personalizada. Para comenzar este procedimiento específico, agregue un gramo de boc-pirazol carboxamamaidina y un gramo de PPh3 a un matraz de fondo redondo de 50 mililitros.

A continuación, se añaden 10 mililitros de THF seco a un matraz de fondo redondo de 50 mililitros en atmósfera inerte a través de un tabique de goma. Con una jeringa, agregue 194 microlitros de metanol seco. Revuelve la solución a temperatura ambiente.

Con una jeringa, agregue una solución preparada de diisopropil azodicarboxilato en THF gota a gota durante 15 minutos. Luego, deje que la solución revuelva durante dos horas a temperatura ambiente. Con un evaporador rotativo, elimine el disolvente a presión reducida.

Después de esto, disuelva el producto crudo en un mililitro de DCM. A continuación, deje una columna flash con 100 gramos de sílice, en acetato de etilo al 10% en una solución de pentano. Cargue el producto crudo disuelto en la columna y agregue el solvente a presión.

Recoja, identifique y combine las fracciones como se describe en el protocolo de texto. A continuación, utilizando un evaporador rotativo, evapore el disolvente a presión reducida para obtener el compuesto deseado en forma de aceite amarillo y viscoso. En primer lugar, añada un gramo de carboxamidina boc-pirazol, un gramo de PPH3 y 0,9 gramos de Dde-6-Aminohexanol a un matraz de fondo redondo de 50 mililitros.

A continuación, añade 10 mililitros de THF seco en una atmósfera inerte utilizando un tabique de goma. Después, disuelva los materiales de partida a temperatura ambiente. Con una jeringa, agregue una solución preparada de diisopropil azodicarboxilato en THF gota a gota durante 15 minutos.

Revuelva la solución durante dos horas a temperatura ambiente. Después de esto, use un evaporador rotativo para eliminar el solvente a presión reducida. Disuelva el producto crudo en 1 mililitro de DCM.

A continuación, cargue una columna flash con 100 gramos de sílice en una solución de dos a uno de pentano y acetato de etilo. Cargue el producto crudo disuelto en la columna y agregue el solvente a presión. Recoja, identifique y combine las fracciones como se describe en el protocolo de texto.

Utilizando un evaporador rotativo, evapore el disolvente a presión reducida para obtener el producto deseado. Para comenzar, disuelva 1,4 gramos de S-metilisotiourea y 2,2 gramos de boc-anhídrido en una solución bifásica de DCM y bicarbonato de sodio acuoso saturado que se agite vigorosamente. Deje remover la mezcla durante 24 horas a temperatura ambiente.

Después de esto, vierta la mezcla en un embudo separador. Separe las capas y extraiga la fase acuosa tres veces con DCM. Luego, combine las fases orgánicas.

Secar las fases orgánicas combinadas con sulfato de sodio. Después de eliminar el solvente usando un evaporador rotativo, disuelva el producto crudo en 2 mililitros de hexano. Cargue una columna flash con 100 gramos de sílice en una solución de cuatro a uno de hexano y acetato de etilo.

Después de esto, cargue el producto crudo disuelto en la columna y agregue el solvente a presión. Después de recolectar e identificar las fracciones, combine las fracciones deseadas. Utilizando un evaporador rotativo, evapore el disolvente a presión reducida para obtener 1,1 gramos de Boc-S-metilisotiourea.

Disolver 250 miligramos de Boc-S-metilisotiourea recolectada en 10 mililitros de DMF seco en un matraz de fondo redondo de 50 mililitros en atmósfera inerte a temperatura ambiente. Use una jeringa para agregar 440 microlitros de DIPEA. Con una jeringa, agregue 245 microlitros de anhídrido acético gota a gota mientras revuelve.

Deje remover la mezcla durante una hora a temperatura ambiente. Luego, use una jeringa para agregar dos mililitros de metanol y revuelva durante 15 minutos. Después de eliminar el solvente a presión reducida, utilizando un evaporador rotativo, disuelva el producto crudo en un mililitro de DCM.

Cargue una columna flash con 60 gramos de sílice en una solución de tres a uno de hexano y acetato de etilo. A continuación, cargue el producto crudo disuelto y agregue el solvente a presión. Recoja, identifique y combine las fracciones como se describe en el protocolo de texto.

Utilizando un evaporador rotativo, evapore el disolvente a presión reducida para obtener 210 miligramos del producto deseado como sólido blanco. Para empezar, disuelva una pequeña cantidad del péptido cíclico ortogonalmente desprotegido en un pequeño volumen de DMF. Agregue dos equivalentes de DIPEA.

Y dos equivalentes del precursor de la guanidinilación. Luego, deje que la solución revuelva durante dos horas a temperatura ambiente. Una vez completada la reacción, retire el solvente.

Vuelva a disolver el péptido cíclico guanidinilado en nitrilo de acetilo y realice la purificación semipreparativa por HPLC como se describe en el protocolo de texto. Después de esto, en un pequeño vaso de vidrio, agregue una solución preparada de ácido trifluoroacético, agua y triisopropilsilano al producto purificado. Revuelva esta mezcla durante una hora a temperatura ambiente y luego observe la desprotección completa con ESIMS.

Agregue 10 mililitros de éter helado a un tubo de centrífuga de 50 mililitros. Con una pipeta Pasteur, añada el péptido desprotegido gota a gota al éter. Centrifugar la suspensión a 5.000 veces g durante cinco minutos.

Después de esto, lave el pellet con éter helado. En centrífuga a 5.000 veces g durante cinco minutos. Repita este lavado y centrifugado una vez más.

A continuación, disuelva el producto en 2 mililitros de agua de grado HBLC y purifique el producto utilizando HPLC semipreparativa como se describe en el protocolo de texto. En este estudio se presenta un método sencillo en la modificación del grupo guanidina en gliginos peptídicos. El progreso de las reacciones se monitoriza mediante cromatografía líquida de alta presión.

En el caso de los residuos más grandes del grupo de las guanidinas, dos horas a menudo no son suficientes para que la reacción llegue a su fin. Por lo tanto, la reacción continúa y los compuestos se purifican mediante HPLC semipreparativa. A continuación, se diluye una pequeña cantidad con DMSO para obtener una solución de tallo para la evaluación biológica en un ensayo de unión en fase sólida similar al ale-ee-so.

Todos los compuestos analizados muestran una afinidad relativamente alta del subtipo integrante alfa v beta tres, y una alta selectividad frente al subtipo integrante alfa cinco beta uno. La primera vez que tuvimos la idea de este método fue cuando buscábamos un método estándar para la guanidinilación durante el SPPS. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo preparar precursores de guanidinilación hechos a medida, para modificar o funcionalizar el grupo guanidina de su péptido objetivo.