Modelo murino de trasplante de páncreas mediante una técnica modificada del pun ¢ o

Mi nombre es Benno Cardini, del Laboratorio de Investigación Daniel Swarovski del Departamento de Cirugía Visceral, de Trasplantes y Torácica de la Universidad Médica de Innsbruck. Hoy vamos a mostrarte un modelo de ratón para el trasplante de páncreas mediante una técnica de manguito modificado. Anestesiar al animal donante con una inyección intraperitoneal de ketamina y xilacina, y rasurar la región abdominal.

A continuación, coloque el recipiente en un campo operatorio en posición supina y frote la región quirúrgica tres veces con clorhexidina. Ahora, realice una laparotomía de línea media desde la región púbica hasta el xifoides y agrande la incisión subcostal a ambos lados para obtener una mejor visión del campo operatorio. A continuación, exteriorizar las vísceras hacia el lado izquierdo e inyectar heparina en la vena cava infrarrenal.

En el siguiente paso, identifique la aorta abdominal proximal al cruce de la vena renal izquierda, socave la aorta y átela en ese punto. Ahora, muévase al hilio hepático, identifique y diseccione el conducto biliar común cerca del hígado y láguelo cerca del páncreas. Finalmente, transecte el conducto biliar común por encima de la ligadura.

A continuación, diseccione la vena porta cerca del hígado para lograr una longitud suficiente para una anastomosis venosa. Como consejo, deje un pequeño trozo de hígado en la vena porta para una identificación más fácil posterior. A continuación, socave la vena renal izquierda en el tejido periaórtico y lávela.

A continuación, seccione la vena renal y el tejido periaórtico, permaneciendo en el lado derecho de la ligadura. A continuación, disecciona sin rodeos la aorta abdominal desde el tronco celíaco hasta el diafragma, socava la aorta cerca del diafragma y transclárala en ese punto. A continuación, identifique y coagule todas las ramas lumbares y transcrítelas.

Ahora seccione la aorta por debajo de la ligadura previamente colocada. Ahora perfunde el páncreas a través del parche aórtico con una solución de perfusión helada hasta que veas que sale efluente de la vena porta. En la parte superior se puede ver la vena porta perfundida y debajo la aorta perfundida.

Ahora vuelva a colocar las vísceras en la cavidad peritoneal y separe escalonadamente el páncreas del intestino usando 8-0 Ligaduras de seda. A partir de la región postpilórica, socavar el duodeno dos veces y tirar 8-0 ligadura de seda a través de él. A continuación, látalo y separa bruscamente el páncreas del duodeno.

Este abordaje se realiza repetidamente hasta llegar al ligamento de Treitz. Es fundamental no dañar el duodeno, ya que excluiría el injerto de los experimentos debido a una posible contaminación. Después de que el páncreas se haya separado completamente del duodeno, pase al mesenterio, socave y gátelo y luego transcórtelo.

En analogía con los pasos anteriores, separe el páncreas del colon transverso socavándolo, ligándolo y finalmente seccionándolo. Ahora, utilizando el mismo enfoque, separe el páncreas de la región biliar diseccionándolo bruscamente después de la ligadura. Posteriormente, disecciona sin rodeos el páncreas del estómago.

Identificar la arteria gástrica izquierda, ligarla y seccionarla. Al final, retire el páncreas con el bazo adherido y colóquelo en una solución de reperfusión helada hasta la nueva implantación. Usa el bazo como asa.

En analogía con el donante, anestesiar al animal receptor con una inyección intraperitoneal de ketamina y xilacina y afeitar la región cervical. A continuación, se coloca el animal donante en el campo operatorio en posición supina y se frota la región cervical tres veces con clorhexidina. A continuación, realice una incisión en la piel desde la incisión yugular hasta el ángulo mandibular derecho.

A continuación, identifique todas las ramas laterales de la vena yugular externa derecha, movilícelas, socavarlas y dividirlas después de la coagulación bipolar. A continuación, se agarra el polo inferior de la glándula submandibular derecha, se levanta cranealmente y se diseca después de la coagulación bipolar de sus vasos alimentarios. Ahora seccione todas las ramas mediales de la vena yugular externa derecha después de la coagulación bipolar.

Lisea la vena yugular externa dos veces más cranealmente posible y divídala entre ligaduras. Pasar el extremo proximal de la vena yugular externa a través de un manguito de polietileno. Aquí es importante que el mango del manguito mire hacia el cirujano que opera.

Como siguiente paso, colocar la pinza venosa microvascular proveniente del lado lateral. Ahora humedezca la vena con heparina, retire la ligadura y tire suavemente de la vena sobre el manguito de polietileno. Al final, fije la vena sobre el manguito con un 8-0 circular Ligadura de seda con un nudo en la parte trasera y tres en la delantera.

Para acceder a la arteria carótida común derecha, movilice y seccione el músculo esternocleidomastoideo derecho después de la coagulación proximal y distal. Posteriormente, movilice suavemente la arteria carótida común, teniendo cuidado de no dañar las estructuras adyacentes como el nervio vago. En analogía con la vena, ligar la arteria carótida común dos veces, lo más cranealmente posible, y dividirla entre ligaduras.

Ahora pase el vaso a través del manguito arterial. Por último, fije el manguito arterial con la pinza microvascular, procedente del lado medial. A continuación, retire la ligadura y ensanche la luz de la arteria con dilatadores de vasos.

Después de un ensanchamiento suficiente de la luz, tire de la arteria sobre el manguito arterial. Al final, en analogía con la vena, fija la arteria con el 8-0 Ligadura de seda. Aquí se puede ver la vena y la arteria reparadas para la anastomosis venosa arterial.

Para la implantación, coloque el injerto en un Ace humedecido en la región cervical. Luego, tira de la vena portal a través de un 8-0 Lazo de ligadura de seda, acorte la vena para una anastomosis sin tensión y luego tire de la vena porta sobre el manguito venoso. Por último, fija la vena con un 8-0 circular Ligadura de seda.

En analogía con la vena, pase el muñón aórtico a través de un asa de ligadura y acorte la aorta. A continuación, tira de la aorta sobre el manguito arterial y finalmente fíjala con un 8-0 circular Ligadura de seda. Antes de la reperfusión, identifique los vasos esplénicos y gátelos y, finalmente, diseccione bruscamente y extraiga el bazo.

Para la reperfusión, primero retire la pinza venosa, seguida de la pinza arterial. Una adecuada reperfusión del injerto muestra una pulsación visible de la arteria y un color rosado de todo el injerto. Humedecer el injerto con solución salina normotérmica.

Antes de cerrar la herida, retire el mango del manguito venoso para evitar que el vaso se retuerza. Al finalizar, cerrar la herida mediante sutura corrida 6-0 e inyectar 0,5 mililitros de suero fisiológico normotérmico por vía subcutánea. Para validar el modelo, probamos la función endocrina del páncreas trasplantado.

Los ratones se volvieron hipoglucemiantes por el tratamiento previo con estreptozotocina cuatro días antes de la cirugía y se consideraron hipoglucemiantes si los niveles de glucosa en sangre estaban por encima de 300 miligramos por ciento. Esta imagen muestra los niveles de glucosa en sangre de ratones control vivos no trasplantados en rojo, así como de receptores de injertos no expuestos a un tiempo prolongado de isquemia fría en azul. Además, los niveles de glucosa en sangre de los receptores de injertos pancreáticos expuestos a 16 horas de tiempo de isquemia fría se muestran en verde.

Los ratones vivos permanecieron hipoglucémicos durante todo el período de observación. Por el contrario, el trasplante de injertos pancreáticos no expuestos a un tiempo prolongado de isquemia fría resultó en una glucemia normal dentro de las 24 horas, lo que confirma la función endocrina del injerto. El trasplante de injertos expuestos a 16 horas de isquemia fría no restauró la glucemia normal a los receptores.

Aún más, en este grupo todos los ratones tuvieron que ser sacrificados dentro de las 48 horas debido a la lesión de isquemia en la reperfusión asociada al daño temprano del injerto. En este vídeo presentamos un método para el trasplante de páncreas en ratones mediante una técnica de manguito sin sutura. Esto es técnica y microquirúrgicamente factible con excelentes tasas de éxito.

Sin embargo, dada la fibrosis progrediente del páncreas, debido a la oclusión del conducto, es nuestra opinión que este modelo es el más adecuado para las áreas de investigación centradas en el daño del injerto asociado a la lesión de reperfusión por isquemia temprana.