Definido y escalable Generación de células hepatocitos como las de las células madre pluripotentes

El objetivo general de este protocolo es producir células similares a los hepatocitos humanos a partir de células madre pluripotentes utilizando matrices de laminina recombinantes en condiciones definidas. Este método permite al usuario personalizar hepatocitos humanos funcionales para estudiar la biología del hígado en la placa. La principal ventaja de esta técnica es que su naturaleza definida permite la producción masiva de hepatocitos con un alto grado de reproducibilidad experimental. Para comenzar el experimento, descongele 100 microgramos por mililitro de laminina-521 recombinante, o LN-521, a cuatro grados Celsius.Diluya el LN-521 descongelado en 1xDBPS helado con calcio y magnesio para hacer una solución de cinco microgramos por mililitro. Agregue un mililitro de la solución de LN-521 de cinco microgramos por mililitro para cubrir un pocillo de una placa de seis pocillos, y balancee la placa para esparcirla uniformemente en el pocillo. A continuación, incube las placas en una incubadora de cultivo celular de 37 grados Celsius al 5% de CO2 durante al menos dos horas para uso urgente. Lleve la placa recubierta de la incubadora a la campana de cultivo de tejidos. Aspire cuidadosamente la solución de recubrimiento LN-521 sin dañar la superficie recubierta. A continuación, añada inmediatamente un mililitro de mTeSR precalentado