Name: Solubilidad de compuestos hidrófobos en la solución acuosa mediante combinaciones de uno mismo-montaje de péptidos y aminoácidos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 8 s
Description: Aprende a disolver compuestos hidrófobos en solución acuosa mediante combinaciones de péptidos autoensamblables y aminoácidos. Este método evita el uso de cosolventes tóxicos y mejora la entrega terapéutica en aplicaciones clínicas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabajo es apoyado por los institutos canadienses de investigación en salud, de funcionamiento otorga 42546 fregona y mopa-119514.

1. preparación de las soluciones del aminoácido <ol><li>prepara y etiqueta dos 50 mL cónico tubos de centrífuga para cada aminoácido (uno para los dos &#34; bajo &#34; y &#34; alta &#34; concentraciones).</li>
	<li>Preparar un gran frasco de 2 L que contenga agua purificada (18.2 MΩ·cm a 25 ° C).</li>
	<li>Calcular la cantidad de cada aminoácido (en gramos) para alcanzar la concentración deseada y pesar la cantidad adecuada de aminoácidos en sus tubos de centrífuga de 50 mL respectivos con una espátula de. 
	Nota: Para la &#34; alta &#34; concentración de los dos aminoácidos con carga negativa, PBS se utiliza en lugar de agua. No podría aumentar sus concentraciones debido a su solubilidad de agua baja y utilizando PBS en lugar de agua ayuda a mantener el pH bajo. Además, los cálculos de concentración fueron obtenidos usando un volumen final de 40 mL para cada solución de aminoácido. Todas las concentraciones de aminoácidos se contornean en la tabla 3. Asegúrese de enjuagar la espátula entre aminoácidos para evitar la contaminación. Se recomienda un enjuague con agua, seguido por limpieza con etanol al 70%.</li>
	<li>Agregar 40 mL de agua purificada (o PBS) en cada tubo de 50 mL con una pipeta serológica. Tapa los tubos y agitar o sacudir vigorosamente hasta que se disuelva. Sonicación de baño de agua (a temperatura ambiente, 130 W, 40 kHz) puede utilizarse también para ayudar en el proceso de solubilidad. 
	Nota: Las siguientes soluciones de aminoácidos son sensibles a la luz y debe cubrirse con papel de aluminio: triptófano, fenilalanina y tirosina (que consisten en estructuras de anillo aromáticas) y cisteína (reactivo - SH del grupo).</li>
</ol> 2. Preparación de soluciones de SAP-AA <ol><li>viales de centelleo preparar 20 mL de la uno mismo-montaje de péptidos. Para un péptido dado de uno mismo-montaje, preparar un frasco por preparados aminoácidos solución (cada combinación se realizará en un frasco aparte).</li>
	<li>Utilizando una balanza analítica de alta performance (con una legibilidad de hasta 0.1 mg o menos), pesan aproximadamente 1 ± 0.2 mg de péptido en el fondo de cada frasco. La tapa después de pesar y registrar el peso exacto del péptido en el cap.</li>
	<li>Pipetear el volumen apropiado de solución de aminoácidos (preparado en la sección 1) en cada frasco contiene péptidos, para alcanzar la concentración deseada de uno mismo-montaje de péptido (0,1 mg/mL para péptidos largos con una longitud de 16 aminoácidos, o 0,2 mg/mL para péptidos más cortos con una longitud de 8 aminoácidos).</li>
	<li>Someter a ultrasonido durante 10 minutos en un agua baño sonicador (130 W, 40 kHz) a temperatura ambiente, garantizando las soluciones dentro de los frascos se sumergen completamente en el baño de agua.</li>
</ol> 3. Preparación de drogas-DMSO o soluciones Stock de drogas etanol <ol><li>cosechadora 1 mg de droga (en este caso, la curcumina con 100% DMSO) y otro 1 mg con etanol 100% a crear dos soluciones. 
	Nota: Agregó 200 μL de DMSO y el 400 μL etanol para hacer acciones DMSO cúrcuma y curcumina etanol que fueron 5 mg/mL y 2.5 mg/mL, respectivamente, debido a la diferente solubilidad en cada disolvente; sin embargo, es importante tener en cuenta que la concentración de población se debe ajustar dependiendo de la droga hidrofóbica de interés. Factores como la solubilidad de la droga y concentración biológica efectiva son importantes en la determinación de este valor. También, tenga en cuenta que el stock se diluirá 50 veces y 100-fold en formulaciones DMSO y etanol, respectivamente, cuando se combina con soluciones de SAP-AA (ver sección 4). Puede ser preferido para preparar un volumen mayor de acciones dependiendo del número de formulaciones requeridas &#8211; en este caso, se utilizará más de 1 mg de droga. La acción puede ser almacenada a-20 ° C; deshielo en hielo y agitar antes de usar.</li>
	<li>Frascos de vortex por 15 s para disolver totalmente la droga.</li>
</ol> 4. Preparación de formulaciones de drogas <ol><li>Prepare claros, tubos de microcentrífuga de 1,5 mL para cada formulación. Asegúrese de que a los tubos de la etiqueta con el previsto autoensamblada péptido del aminoácido (y concentración) y co-solvente.</li>
	<li>Añadir 10 μl del stock de drogas-DMSO, o 20 μl etanol drogas stock a tubos de microcentrífuga apropiado.</li>
	<li>Agregar 990 μl de soluciones ácidas de SAP-AA al apropiado etiquetado tubos de microcentrífuga con stock de drogas-DMSO y 980 μl a los que contienen stock de drogas-etanol. Esto produce formulaciones de drogas de 1 mL con etanol al 1% DMSO o 2%. 
	Nota: La concentración final de todas las formulaciones de curcumina fue 0.5 mg/mL según el protocolo. Una vez más, esto variará cuando utilizando otros compuestos hidrofóbicos o comenzando con una concentración de acciones diferentes (ver paso 3.1)</li> <li>Vortex vigorosamente por 30 s y permiten formulaciones reposar 30 min</li></ol>
 5. pruebas de solubilidad <ol><li>después de período de descanso, vigorosamente nuevamente vortex por 30 s.</li>
	<li>Las formulaciones a 14.220 x g durante 1 minuto de la centrífuga</li>
	<li>Analizar la parte inferior de los tubos de microcentrífuga para precipitación (visualización).</li>
</ol>

<ol><li>Holmes, T. C., de Lacalle, S., Su, X., Liu, G., Rich, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensive+neurite+outgrowth+and+active+synapse+formation+on+self-assembling+peptide+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Extensive neurite outgrowth and active synapse formation on self-assembling peptide scaffolds.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 97 (12), 6728-6733 (2000).</li>
<li>Davis, M. E., Motion, J. P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+self-assembling+peptide+nanofibers+create+intramyocardial+microenvironments+for+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Injectable self-assembling peptide nanofibers create intramyocardial microenvironments for endothelial cells.</a> Circulation. 111 (4), 442-450 (2005).</li>
<li>Matson, J. B., Stupp, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide+scaffolds+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide scaffolds for regenerative medicine.</a> Chem. Commun. 48 (1), 26-33 (2012).</li>
<li>Tatman, P. D., Muhonen, E. G., Wickers, S. T., Gee, A. O., Kim, E., Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptides+for+stem+cell+and+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater.+Sci%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptides for stem cell and tissue engineering.</a> Biomater. Sci. 4 (4), 543-554 (2016).</li>
<li>Keyes-Baig, C., Duhamel, J., Fung, S. -Y., Bezaire, J., Chen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide+as+a+potential+carrier+of+hydrophobic+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide as a potential carrier of hydrophobic compounds.</a> J. Am. Chem. Soc. 126 (24), 7522-7532 (2004).</li>
<li>Kumar, P., Pillay, V., Modi, G., Choonara, Y. E., du Toit, L. C., Naidoo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptides%3A+implications+for+patenting+in+drug+delivery+and+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Recent+Pat.+Drug+Deliv.+Formul%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptides: implications for patenting in drug delivery and tissue engineering.</a> Recent Pat. Drug Deliv. Formul. 5 (1), 24-51 (2011).</li>
<li>Wang, H., Yang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-peptide-based+molecular+hydrogels%3A+novel+gelation+strategies+and+applications+for+tissue+engineering+and+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Short-peptide-based molecular hydrogels: novel gelation strategies and applications for tissue engineering and drug delivery.</a> Nanoscale. 4, 5259-5267 (2012).</li>
<li>French, K. M., Somasuntharam, I., Davis, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide-based+delivery+of+therapeutics+for+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide-based delivery of therapeutics for myocardial infarction.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 96, 40-53 (2016).</li>
<li>Zhang, S., Holmes, T., Lockshin, C., Rich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+assembly+of+a+self-complementary+oligopeptide+to+form+a+stable+macroscopic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Spontaneous assembly of a self-complementary oligopeptide to form a stable macroscopic membrane.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90 (8), 3334-3338 (1993).</li>
<li>Bowerman, C. J., Nilsson, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembly+of+amphipathic+%CE%B2-sheet+peptides%3A+insights+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Biopolymers%22%5BJournal%5D)">Self-assembly of amphipathic β-sheet peptides: insights and applications.</a> Biopolymers. 98 (3), 169-184 (2012).</li>
<li>Amidon, G., Lennernäs, H., Shah, V., Crison, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+theoretical+basis+for+a+biopharmaceutic+drug+classification%3A+the+correlation+of+in+vitro+drug+product+dissolution+and+in+vivo+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">A theoretical basis for a biopharmaceutic drug classification: the correlation of in vitro drug product dissolution and in vivo bioavailability.</a> Pharm. Res. 12 (3), 413-420 (1995).</li>
<li>Shi, Y., Porter, W., Merdan, T., Li, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+intravenous+delivery+of+poorly+water-soluble+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Recent advances in intravenous delivery of poorly water-soluble compounds.</a> Expert Opin. Drug Deliv. 6 (12), 1261-1282 (2009).</li>
<li>Bawa, R., Fung, S. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide-based+nanoparticles+enhance+cellular+delivery+of+the+hydrophobic+anticancer+drug+ellipticine+through+caveolae-dependent+endocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide-based nanoparticles enhance cellular delivery of the hydrophobic anticancer drug ellipticine through caveolae-dependent endocytosis.</a> Nanomedicine. 8 (5), 647-654 (2012).</li>
<li>Liu, J., Zhang, L., Yang, Z., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+release+of+paclitaxel+from+a+self-assembling+peptide+hydrogel+formed+in+situ+and+antitumor+study+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Nanomed%22%5BJournal%5D)">Controlled release of paclitaxel from a self-assembling peptide hydrogel formed in situ and antitumor study in vitro.</a> Int. J. Nanomed. 6, 2143-2153 (2011).</li>
<li>Wu, Y., Sadatmousavi, P., Wang, R., Lu, S., Yuan, Y., Chen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide-based+nanoparticles+enhance+anticancer+effect+of+ellipticine+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Nanomed%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide-based nanoparticles enhance anticancer effect of ellipticine in vitro and in vivo.</a> Int. J. Nanomed. 7, 3221-3233 (2012).</li>
<li>Fung, S. Y., Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/adfm.200800860/abstract">Self-Assembling Peptide as a Potential Carrier for Hydrophobic Anticancer Drug Ellipticine: Complexation, Release and In Vitro Delivery.</a> Adv. Funct. Mater. 19 (1), 74-83 (2009).</li>
<li>Fung, S. -Y., Oyaizu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+nanoscale+combinations+of+self-assembling+peptides+and+amino+acids+of+the+Src+tyrosine+kinase+inhibitor+in+acute+lung+injury+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The potential of nanoscale combinations of self-assembling peptides and amino acids of the Src tyrosine kinase inhibitor in acute lung injury therapy.</a> Biomaterials. 32 (16), 4000-4008 (2011).</li>
<li>Pacheco, S., Kanou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formulation+of+hydrophobic+therapeutics+with+self-assembling+peptide+and+amino+acid%3A+A+new+platform+for+intravenous+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">Formulation of hydrophobic therapeutics with self-assembling peptide and amino acid: A new platform for intravenous drug delivery.</a> J. Control. Release. 239, 211-222 (2016).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

En el procedimiento de formulación, hay varios pasos críticos y puntos a considerar en la solución de problemas. En primer lugar, como estamos trabajando con diversos componentes y las concentraciones, varios pasos de vórtice a través del protocolo que sean todas las concentraciones de uniforme y correcta. Algunas de las soluciones de alta concentración, hidrofóbico aminoácido pueden todavía no ser disuelto totalmente después de Vortex, y en este caso, pueden ser sacudidos vigorosamente a mano para ayudar en el proceso. ...

Programas de ajuste estructural son una clase de biomateriales que han sido estudiados extensivamente como andamios 3D en medicina regenerativa1,2,3,4. Más recientemente sin embargo, ellos han sido explotados como vehículos para la entrega de la terapéutica debido a sus propiedades biológicas únicas5,6,7,8. Programas de ajuste estructural naturalmente montan en nanoestructuras estable9, proporcionando así un medio de encapsulación del fármaco y la protección. Programas de ajuste estructural son anfipáticos, conformada por un patrón específico de repeticiones del aminoácido hidrofóbico e hidrofílico, conducir su uno mismo-Asamblea de9,10 y lo que les permite servir como un medio entre hidrofóbico e hidrofílico ambientes. En consecuencia, para la administración clínica de drogas hidrofóbicas, que tienen muy baja biodisponibilidad y absorción en el cuerpo debido a la falta de solubilidad en ambientes acuosos11,12 – SAPs son prometedores como una entrega vehículo. Además, su patrón de secuencia implica que SAPs pueden racionalmente diseñados y desarrollados para maximizar la compatibilidad con cualquier fármaco dado o compuesto (es decir, basadas en grupos funcionales) y además ayudar a la solubilidad.
Programas de ajuste estructural se han aplicado como vehículos de entrega de drogas eficaces en muchos in vitro e in vivo configuración13,14,15,16. También han mostrado gran seguridad y biocompatibilidad. Sin embargo, debido a la baja osmolaridad de preparaciones SAP de la droga, no puede utilizarse para inyecciones intravenosas como en ajustes clínicos13. Teniendo en cuenta esta restricción, recientemente hemos desarrollado una estrategia que combina programas de ajuste estructural con soluciones de aminoácidos con el fin de reducir el uso de solventes tóxicos Co y aumentar la osmolaridad de la formulación y por lo tanto, relevancia clínica. Se decidió utilizar los aminoácidos como son los bloques de edificio del SAPs, ya son clínicamente aceptados, y en combinación con programas de ajuste estructural, que aumentan la solubilidad de la droga hidrofóbica mientras que reduce la cantidad de SAP17,18.
Hemos escudriñado combinaciones AA SAP como plataforma generalizada de solubilidad de la droga hidrofóbica y posterior entrega crear una tubería de la proyección de múltiples pasos y aplicando a inhibidor de la fuente, PP2, como un compuesto hidrofóbico modelo. En este proceso, se examinó el efecto de cambiar componentes de la formulación, en última instancia prueba 6 diferentes programas de ajuste estructural, todos los 20 aminoácidos en 2 concentraciones diferentes (bajo y alto; bajo basados en concentraciones en aplicaciones clínicas existentes y de alta las concentraciones fueron x 2, x 3 o x 5 la concentración clínica se basa en la solubilidad máxima de cada aminoácido en el agua) y 2 diferentes solventes Co – y las combinaciones que solubilizados PP2 para su posterior análisis. Esta formulación de la droga demostró para ser eficaz como un vehículo de entrega de droga en cultivo celular, así como en vivo modelos utilizando administración intratraqueal e intravenosa. Además, nuestro trabajo se refirió a la versatilidad de combinaciones de SAP-AA en múltiples solubilizantes, estructuralmente diferentes compuestos hidrofóbicos en ambientes acuosos; específicamente, los medicamentos rottlerin y curcumina18. Este manuscrito describe el método de formulación SAP-AA y el análisis de solubilidad de la curcumina como ejemplo de la etapa primaria en nuestros proyectos de investigación. Este protocolo proporciona una forma simple y reproducible a la pantalla de las óptimas combinaciones de SAP-AA, que disuelven cualquier compuesto hidrofóbico dado.

<table><tbody><tr><td>EAK16-I</td><td>CanPeptide Inc.</td><td>Secuencia de péptidos personalizada</td><td>: AEAKAEAKAEAKAEAK, acetilación de N-terminal y amidación de C-terminal, >95% de pureza por HPLC</td></tr><tr><td>EAK16-II</td><td>CanPeptide Inc.</td><td>Secuencia de péptidos personalizada</td><td>: AEAEAKAKAEAEAKAK, acetilación de N-terminal y amidación de C-terminal, >95% de pureza por HPLC</td></tr><tr><td>EAK16-IV</td><td>CanPeptide Inc.</td><td>Secuencia de péptidos personalizada</td><td>: AEAEAEAEAKAKAKAK, acetilación N-terminal y amidación C-terminal, >95% puro por HPLC</td></tr><tr><td>EFK8-II</td><td>CanPeptide Inc.</td><td>Secuencia de péptidos personalizada</td><td>: FEFEFKFK, acetilación N-terminal y amidación C-terminal, >95% de pureza por HPLC</td></tr><tr><td>A6KE</td><td>CanPeptide Inc.</td><td>Secuencia de péptidos personalizada</td><td>: AAAAAAKE, acetilación N-terminal y amidación C-terminal, >95% puro por HPLC</td></tr><tr><td>P6KE</td><td>CanPeptide Inc.</td><td>Secuencia de péptidos personalizada</td><td>: PPPPPPPKE, acetilación N-terminal y amidación C-terminal, >95% puro por HPLC</td></tr><tr><td>Alanina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7469-100G</td><td>L-Alanina</td></tr><tr><td>Isoleucina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I7403-100G</td><td>L-Isoleucina</td></tr><tr><td>Leucina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L8912-100G</td><td>L-Leucina</td></tr><tr><td>Metionina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5308-100G</td><td>L-metionina</td></tr><tr><td>prolina</td><td>sigma-aldrich</td><td>p5607-100g</td><td>l-prolina</td></tr><tr><td>valina</td><td>sigma-aldrich</td><td>v0513-100g</td><td>l-valina</td></tr><tr><td>fenilalanina</td><td>sigma-aldrich</td><td>p5482-100g</td><td>l-fenilalanina</td></tr><tr><td>triptófano</td><td>sigma-aldrich</td><td>T8941-100G</td><td>L-triptófano</td></tr><tr><td>tirosina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8566-100G</td><td>l-tirosina</td></tr><tr><td>Glicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8790-100G</td><td>L-glicina</td></tr><tr><td>Asparagina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4159-100G</td><td>L-Asparagina</td></tr><tr><td>Glutamina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8540-100G</td><td>L-glutamina</td></tr><tr><td>Serina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7219-100G</td><td>L-Serina</td></tr><tr><td>Treonina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8441-100G</td><td>L-Treonina</td></tr><tr><td>Histidina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6034-100G</td><td>L-Histidina</td></tr><tr><td>Lisina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L5501-100G</td><td>L-Lisina</td></tr><tr><td>Arginina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8094-100G</td><td>L-Arginina</td></tr><tr><td>Ácido aspártico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7219-100G</td><td>Ácido L-aspártico</td></tr><tr><td>Ácido glutámico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8415-100G</td><td>Ácido</td></tr> <tr><td>L-glutámicoCisteína</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7352-100G</td><td>L-Cisteína</td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4540-500ML</td><td>DMSO</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>277649-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Curcumina</td> anhidra <td>Sigma-Aldrich</td><td>08511-10MG</td><td>Droga hidrofóbica, curcumina</td></tr><tr><td>Rottlerin</td><td>EMD Millipore</td><td>557370-10MG</td><td>Droga hidrofóbica, rottlerina</td></tr><tr><td>PP2</td><td>Enzo&nbsp;</td><td>BML-EI297-0001</td><td>Fármaco hidrofóbico, PP2</td></tr><tr><td>Viales de centelleo</td><td>VWR</td><td>2650-66022-081</td><td>Vidrio de borosilicato, con tapón de rosca, 20 mL. Viales para el pesaje de péptidos.</td></tr><tr><td>Tubos de centridación cónicos Falcon 50 mL</td><td>VWR</td><td>352070</td><td>Polipropileno, estéril, 50 mL. Para soluciones de aminoácidos.</td></tr></tbody></table>

solubilidad de compuestos hidrófobos en la solución acuosa mediante combinaciones de uno mismo-montaje de péptidos y aminoácidos

Solubility of Hydrophobic Compounds in Aqueous Solution Using Combinations of Self-assembling Peptide and Amino Acid

Uno mismo-montaje péptidos (SAPs) son prometedores vehículos para la entrega de tratamientos hidrófobos para aplicaciones clínicas; sus propiedades anfipáticos que puedan disolver compuestos hidrofóbicos en el ambiente acuoso del cuerpo humano. Sin embargo, soluciones de peptide uno mismo-montaje tienen compatibilidad sanguínea deficiente (p. ej., baja osmolaridad), lo que dificulta su aplicación clínica a través de administración intravenosa. Recientemente hemos desarrollado una plataforma generalizada para la entrega de drogas hidrofóbicas, que combina programas de ajuste estructural con soluciones de aminoácidos (SAP-AA) para mejorar la solubilidad de la droga y aumentar la osmolaridad de la fórmula para alcanzar los requerimientos para aplicaciones clínicas. Esta estrategia de formulación fue probada a fondo en el contexto de tres compuestos hidrofóbicos estructuralmente diferentes: PP2 rottlerin y curcumina – para demostrar su versatilidad. Además, se analizaron efectos de cambiar componentes de la formulación mediante el análisis de 6 diferentes programas de ajuste estructural, 20 aminoácidos existentes naturalmente en concentraciones bajas y altas y dos diversos solventes Co dimetil sulfóxido (DMSO) y etanol. Nuestra estrategia demostrado para ser efectiva en la optimización de componentes para un determinado fármaco hidrofóbico y función terapéutica del inhibidor formulado, PP2, fue observado tanto in vitro como in vivo. Este manuscrito describe nuestro método de formulación generalizada utilizando SAP AA combinaciones de compuestos hidrofóbicos y análisis de solubilidad como un primer paso hacia el posible uso de estas formulaciones en estudios más funcionales. Incluyen los resultados de solubilidad representativas para la formulación de la curcumina compuesta hidrofóbica y discutir cómo nuestra metodología sirve como una plataforma para futuros estudios biológicos y modelos de la enfermedad.

Para la droga hidrofóbica, curcumina, produjimos formulaciones con 20 todos naturalmente existen aminoácidos en concentraciones bajas, en combinación con un único SAP, EAK16-II, como una prueba de principio. También probamos formulaciones utilizando DMSO y etanol como co solventes. En total, esto produjo 40 curcumina formulaciones, cada una con diferentes componentes. Es importante señalar que, en nuestros estudios anteriores utilizando el inhibidor Src, PP2, incluido más opciones para SA...

Este protocolo describe un medio clínicamente aplicable de disolver compuestos hidrofóbicos en un ambiente acuoso utilizando combinaciones de uno mismo-montaje de soluciones de péptidos y aminoácidos. Nuestro método tiene una limitación importante de la terapéutica hidrofóbica, que carecen de seguro y eficiente medio de solubilidad y entrega de métodos en contextos clínicos.

Solubilidad de compuestos hidrófobos en la solución acuosa mediante combinaciones de uno mismo-montaje de péptidos y aminoácidos

Self-assembling peptides (SAPs) are promising vehicles for the delivery of hydrophobic therapeutics for clinical applications; their amphipathic ...

El objetivo general de este método es aumentar la solubilidad de compuestos hidrofóbicos en solución acuosa para su posible administración en entornos clínicos. Este método aborda una limitación clave en el campo médico, que es la falta de uso de compuestos hidrofóbicos en entornos clínicos debido a su baja solubilidad en sistemas acuosos como la sangre. La principal ventaja de esta técnica es que los compuestos hidrofóbicos pueden disolverse en soluciones acuosas sin un uso significativo de co-disolventes tóxicos.Primero, etiquete dos tubos cónicos de centrífuga de 50 litros para cada aminoácido. Prepare un matraz grande de dos litros que contenga agua purificada. Después de calcular la cantidad de cada aminoácido para las concentraciones deseadas, pese las cantidades adecuadas de aminoácidos en los tubos de centrífuga respectivos utilizando una espátula.Utilizando una pipeta serológica, agregue 40 mililitros de agua purificada a cada tubo de centrífuga. Después de colocar las tapas a los tubos, vortexee las muestras hasta que se disuelvan. Utilizando una balanza analítica de alto rendimiento, pese aproximadamente uno más o menos 0,2 miligramos de péptido en el fondo de un vial de

solubility-hydrophobic-compounds-aqueous-solution-using-combinations

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Un simple y general método manual peptoide síntesis referida a un equipo y reactivos básicos, disponibles en el mercado se perfila, lo que permite peptoides para ser fácilmente sintetizada en la mayoría de los laboratorios. La síntesis, purificación y caracterización de un 36mer peptoide anfifílicas se describe, así como su auto-ensamblaje en muy ordenada nanoláminas.

En fase sólida Submonomer Síntesis de Polímeros peptoide y su auto-ensamblaje en altamente ordenadas nanoláminas

En este trabajo se describe la formación de estructuras a base de péptidos altamente ordenadas por el proceso espontáneo de auto-ensamblaje. El método utiliza péptidos disponibles comercialmente y equipo de laboratorio común. Esta técnica se puede aplicar a una gran variedad de péptidos y puede conducir al descubrimiento de nuevos conjuntos basados ​​en péptidos.

Formación de estructuras biomoleculares ordenada por el auto-ensamblaje de péptidos cortos

La síntesis del péptido base poliamina Anfífilos (PPA) es un reto importante debido a la presencia de múltiples nitrógenos de Amina, que requiere un uso juicioso de la protección de los grupos para enmascarar estas funcionalidades reactivas. En este papel, describimos un método fácil para la preparación de estas nueva clase de moléculas de uno mismo-montaje.

Protocolo fácil para la síntesis de uno mismo-montaje base poliamina péptido Anfífilos (PPAs) y relacionados con biomateriales

Un protocolo para la síntesis de un 1, 2-dithiolane modificada de péptidos y la caracterización de las estructuras supramoleculares resultantes del peptide uno mismo-Asamblea.

Síntesis y caracterización de 1, 2-Dithiolane modifican uno mismo-montaje de péptidos

Este protocolo describe un método eficiente para sintetizar una nanoemulsión de un conjugado de ácido oleico acids-platinum(II) estabilizado con un tripéptido de lisina-tirosina-fenilalanina (KYF). Las formas de nanoemulsión condiciones suaves sintético a través de autoensamblaje de lo KYF y el conjugado.

Una nanoemulsión tripéptido-estabilizado del ácido oleico

Se presenta un protocolo para la síntesis de oligómeros peptoides codificados con información y para el autoensamblaje dirigido por secuencia de estos peptoides en escaleras moleculares utilizando aminas y aldehídos como pares reactivos covalentes dinámicos y Lewis de tierras raras ácidas metal triflos como reactivos multifunción.

Síntesis de peptoides que llevan información y su autoensamblaje covalente dinámico dirigido por secuencia

Reportamos un protocolo para producir una membrana lipídica híbrida en la interfaz agua/aire dopando la bicapa lipídica con moléculas de cobre (II) 2,9,16,23-tetra-tert-butyl-29H,31H-phthalocyanine (CuPc). La membrana lipídica híbrida resultante tiene una estructura sándwich de lípidos/CuPc/lípidos. Este protocolo también se puede aplicar a la formación de otros nanomateriales funcionales.

Autoensamble de membranas lipídicas híbridas dopadas con moléculas orgánicas hidrófobas en la interfaz agua/aire

Este artículo proporciona protocolos para el diseño y autoensamble de nanoestructuras a partir de oligómeros de ácido nucleico modificados gamma en mezclas de disolventes orgánicos.

Autoensamble de ácidos nucleicos de péptidos modificados con gamma en nanoestructuras complejas en mezclas de disolventes orgánicos

Este protocolo presenta tres métodos de preparación rápidos y sencillos que utilizan las condiciones ambientales para desencadenar el autoensamblaje de péptidos en hidrogeles. Además, se describe la caracterización de los hidrogeles peptídicos, demostrando que se pueden formar hidrogeles peptídicos mecánicamente estables en estas sencillas condiciones.

Preparación de hidrogeles de péptidos autoensamblados mecánicamente estables

Determinación del vaciamiento gástrico con un no-invasivo...

Evaluación del vaciamiento gástrico en ratones diabéticos no obesos mediante un [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octanoico prueba del aliento ácido

Aprende a disolver compuestos hidrófobos en solución acuosa mediante combinaciones de péptidos autoensamblables y aminoácidos. Este método evita el uso de cosolventes tóxicos y mejora la entrega terapéutica en aplicaciones clínicas.

Solubilidad de compuestos hidrófobos en la solución acuosa mediante combinaciones de uno mismo-montaje de péptidos y aminoácidos (Video) | JoVE Journal

Solubilidad de compuestos hidrófobos en la solución acuosa mediante combinaciones de uno mismo-montaje de péptidos y aminoácidos

Explorar más videos