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DOI: 10.3791/57486-v
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Todas las especies patógenas de Leishmania residen y replican dentro de macrófagos de hospederos vertebrados. Aquí, presentamos un protocolo para infectar macrófagos derivados de médula ósea murinos en cultura con Leishmania, seguida por la cuantificación precisa de la cinética de crecimiento intracelular. Este método es útil para el estudio de los factores individuales que influyen en la interacción huésped-patógeno y virulencia de Leishmania .
El objetivo general de este experimento es evaluar la virulencia de varias cepas de Leishmania a través de la infección in vitro de macrófagos derivados de la médula ósea murina, y la posterior cuantificación de la cinética de crecimiento intracelular del parásito. Este método puede ayudarnos a responder preguntas clave sobre los factores tanto del macrófago del huésped como del patógeno que determinan la virulencia de los parásitos infecciosos de Leishmania. La principal ventaja de esta técnica es que se trata de un método rápido, económico y fiable que requiere significativamente menos animales, en comparación con los estudios in vivo.
Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia la terapia de la leishmaniasis, ya que se puede utilizar para evaluar la infectividad de las cepas de Leishmania mutadas o la eficacia de los compuestos terapéuticos. La demostración visual de este método es fundamental, ya que los pasos de aislamiento de macrófagos derivados de la médula ósea y la cuantificación de parásitos intracelulares son difíciles de aprender solo con protocolos escritos. Comience asegurando un ratón hembra de cuatro a seis semanas de edad a una tabla de disección y desinfecte al animal con etanol al 70%.
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