Explorar el potencial de la hoja de células madre mesenquimales en el desarrollo de Carcinoma Hepatocelular en Vivo

Hola, soy el Dr. Alaa Alshareeda del Centro Internacional de Investigación Médica Rey Abdullah en el Departamento de Células Madre y Medicina Regenerativa. Hoy demostraremos el efecto de las células madre mesenquimales en el desarrollo de carcinoma hepatocelular en un modelo de rata mediante el uso de la tecnología de lámina celular. Hola, soy Abdullah Almubarak.

Trabajo en Cirugía Experimental y Laboratorio Animal en la Universidad King Saud. Utilizamos la rata desnuda para evitar cualquier rechazo después de trasplantar la lámina de células. Este diagrama muestra el procedimiento de trasplante de láminas celulares en ratas desnudas.

En este estudio se utilizarán ratas desnudas de ocho a 12 semanas de edad. Primero, corte las ratas y haga un corte de siete a diez centímetros entre la piel y los músculos subyacentes con bisturí para exponer el hígado. Para transferir la lámina de células, utilice una membrana estéril.

Coloque la membrana sobre la lámina celular para recogerla. A continuación, coloque la lámina celular con la membrana sobre un lóbulo del hígado. Construcción de lámina de celda.

Antes de sembrar las células, cubra las placas de cultivo UpCell de 3,5 centímetros sensibles a la temperatura con FBS sin diluir. El recubrimiento de las placas con FBS favorece el crecimiento de las células en la capa de membrana y evita la degradación de las células. Asegúrese de cubrir toda la superficie de los platos.

Incubar las placas durante 24 horas a 37 grados centígrados en una atmósfera humidificada que contenga un 5% de dióxido de carbono y un 95% de aire. Al día siguiente, retire el exceso de FBS y deje que los platos se sequen a temperatura ambiente durante al menos una hora. Siembrar al menos un millón de células cancerosas HepG2 solas o cocultivadas con células madre mesenquimales en un medio de cultivo DMEM.

El medio suplementado con 10% de FBS y 1% de penicilina-estreptomicina. La proporción utilizada de células cancerosas a células madre mesenquimales en este estudio es de 4:1. Después de agregar las celdas, agite suavemente los platos.

Incubar las células a 37 grados centígrados en una atmósfera humidificada que contenga un 5% de dióxido de carbono y un 95% de aire. Desprendimiento de la lámina de la celda. Al 100% de confluencia celular, saque las placas de la incubadora a 37 grados centígrados.

Ahora, incube la lámina de células cancerosas HepG2 durante una hora a temperatura ambiente, mientras incuba la HepG2 cocultivada con células madre mesenquimales durante 30 a 40 minutos a 20 grados Celsius en una atmósfera humidificada que contenga 5% de dióxido de carbono al 95% de aire. Durante el tiempo de incubación para el desprendimiento de la lámina celular, inicie el procedimiento con el animal. Todos los estudios en animales fueron aprobados por el comité de ética de la Universidad Rey Saud.

Realización del procedimiento quirúrgico. Compruebe la profundidad de la anestesia probando el reflejo de retirada del pedal. Desinfecte el área de la cirugía con yodo.

Ahora, aplica un segundo exfoliante con yodo. Cubra al animal con un paño esterilizado para evitar la contaminación de la incisión. Con un bisturí esterilizado, haga un corte entre la piel y los músculos subyacentes, de unos siete a diez centímetros de tamaño, para exponer el hígado.

Separe el músculo abdominal de la piel con el borde trasero plano del bisturí. Apuñale con cuidado la línea alba con un bisturí y extienda el corte con una tijera afilada. Trasplante de lámina celular en hígado de rata.

Golpee suavemente el plato de cultivo sobre el banco para separar la hoja de su superficie. Separe la hoja de celdas de la superficie del plato raspando los bordes de la hoja en un semicírculo. Ahora, retire suavemente todo el medio de cultivo del plato.

Asegúrese de que la hoja esté intacta sin ningún daño, de lo contrario, no se puede usar. Prepare una membrana estéril para recolectar y transferir la lámina de células. Entonces, primero, empape la membrana con solución salina normal, luego elimine el exceso de solución salina con un bastoncillo de algodón estéril.

Coloque la membrana húmeda sobre la lámina celular, evitando cualquier burbuja de aire entre la membrana y la lámina celular. Agregue unas gotas de solución salina normal sobre la membrana y la lámina celular para recoger el material. Deje la membrana durante unos segundos para asegurarse de que la lámina celular esté correctamente adherida a la membrana, luego recójala.

Ahora, prepare el hígado para el trasplante. Asegúrese de que la superficie del hígado esté seca. Coloque la membrana con la lámina celular sobre un solo lóbulo del hígado de la rata.

Agregue unas gotas de solución salina esterilizada para separar la lámina celular de la membrana. Espere cinco minutos antes de retirar con cuidado la membrana. La lámina de células se puede ver adjunta en el hígado en este video.

Finalmente, cierre los músculos subyacentes y las incisiones de la piel con cinco suturas de nailon. Después de cerrar la incisión, desinfecte el área de la cirugía con betadine. El tiempo desde que se apaga la anestesia hasta que se levanta la cabeza es variable, pero suele oscilar entre cinco y 20 minutos.

Esta figura muestra el tumor desarrollado en el hígado de rata después de un mes de trasplante de lámina de células HepG2. Aquí, el tumor se desarrolló después del trasplante de células cancerosas HepG2 fabricadas con láminas celulares y células madre mesenquimales de la médula ósea. Mientras que este muestra, el tumor más pequeño desarrollado en el hígado de rata después del trasplante de la lámina celular fabricada a partir de células cancerosas HepG2 y células madre mesenquimales del cordón umbilical, esta figura muestra la tinción H y E del hígado de rata después de un mes de trasplante de lámina celular.

Donde A representa células hepáticas normales de rata y B muestra células hepáticas cancerosas de rata. Conclusión. Entonces, después de ver este video, debería poder desarrollar un modelo de carcinoma hepatocelular en ratas desnudas mediante el uso de la tecnología de láminas de células. Gracias por mirar.