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DOI: 10.3791/58542-v
Eva Königshausen1, Sebastian A. Potthoff1, Raphael Haase1, Catherine Meyer-Schwesinger2, Ernest Kaufmann1, L. Christian Rump1, Johannes Stegbauer1, Lorenz Sellin1, Ivo Quack1, Magdalena Woznowski1
1Department of Nephrology, Medical Faculty,Heinrich-Heine-University, 2Institute of Cellular and Integrative Physiology,University Medical Center Hamburg-Eppendorf
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Aquí presentamos un protocolo para murino en vivo etiquetado de proteínas de la superficie celular glomerular con biotina. Este protocolo contiene información sobre la perfusión de los riñones de ratón, aislar glomérulos y realizar endógena inmunoprecipitación de la proteína de interés.
Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la nefrología sobre el papel del tráfico de proteínas de superficie celular en la enfermedad renal proteluica y no protegica. Las principales ventajas de esta técnica son que facilita el estudio del tráfico de proteínas superficiales celulares in-vivo y que se puede analizar más de una proteína por experimento. Aunque este método puede proporcionar información sobre el tráfico de superficies de células glomerulares, también se puede aplicar a otros sistemas de órganos que se perfunden y son accesibles mediante técnicas de aislamiento.
Comience por confirmar la falta de respuesta al pellizco del dedo del dedo del dedo del dedo del dedo y desinfectar el lado ventral del ratón anestesiado con 70%isopropílico. Haz un corte medio a través de la piel desde la pelvis hasta el esternón y usa pinzas para eliminar la piel de la fascia abdominal. Corta la piel a ambos lados de la línea media abdominal y haz un medio a través de la capa muscular abdominal desde la vejiga hasta el xifoide.
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