Etiquetado diferencial de la superficie celular e internalizado Proteínas después Antibody alimentación de vivo cultivadas neuronas

El objetivo general de este procedimiento es marcar proteínas en la superficie de las neuronas vivas y, posteriormente, distinguir las proteínas de superficie de las proteínas internalizadas mediante el marcaje diferencial de anticuerpos secundarios. Para hacer esto, las neuronas primarias cultivadas en un cubreobjetos se incuban con un anticuerpo dirigido contra un epítopo de superficie y se incuban para permitir la internalización. Después de la incubación, se aplica un anticuerpo secundario marcado con fluorescencia para identificar las proteínas expuestas a la superficie.

A continuación, se aplica el exceso de anticuerpo secundario no marcado para bloquear los complejos de anticuerpos primarios de proteínas de superficie restantes. A continuación, las neuronas cultivadas se permean y se aplica un anticuerpo secundario de un color diferente para detectar la proteína internalizada. En última instancia, se pueden obtener resultados que muestran los niveles relativos de proteína internalizada frente a proteína de superficie a través de microscopía de inmunofluorescencia.