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DOI: 10.3791/58748-v
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This study evaluates the impact of fluorescent proteins on the aggregation and toxicity of misfolded polyglutamine expansions using yeast as a model system. The protocols developed allow for the rapid and scalable assessment of fluorescent protein behavior and its effects on fusion partners.
Este artículo describe los protocolos para evaluar el efecto de proteínas fluorescentes en la agregación y toxicidad del polyglutamine mal plegadas ampliación para la evaluación rápida de una proteína fluorescente recién desacostumbrada en el contexto de reporteros fluorescentes.
Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de las proteínas fluorescentes, como cómo las proteínas fluorescentes pueden afectar a sus socios de fusión. La principal ventaja de esta técnica es que proporciona una evaluación rápida y fácilmente escalable de los efectos de las proteínas fluorescentes y sus socios de fusión. Aunque este método puede proporcionar información sobre el comportamiento de las proteínas fluorescentes, también se puede aplicar a otras etiquetas codificadas genéticamente.
También demostrará este procedimiento Sonja Di Gregorio, que es estudiante de posgrado en la Universidad Occidental. Cada proteína fluorescente que se prueba mediante este método se clona primero en un vector de expresión de levadura que codifica una versión inducible de gactosa del exón HTT etiquetado con FLAG, uno que alberga la repetición no tóxica 25Q o la repetición tóxica 72Q de la enfermedad de Huntington. Los clones se seleccionan y verifican mediante secuenciación y posteriormente se transforman en levadura.
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