Proyección de imagen confocal de ARN bicatenario y receptores de reconocimiento de patrón en la infección por Virus de ARN de sentido negativo

RNA de doble hebra producido durante la replicación de virus de ARN puede ser reconocido por los receptores de reconocimiento de patrón para inducir una respuesta inmune innata. Virus de ARN de sentido negativo, la interacción entre el bajo nivel dsARN y PRRs sigue siendo confusa. Hemos desarrollado un método de microscopia confocal para visualizar arenavirus dsARN y PRR en células individuales.

El ensayo tradicional de detección de ARN de doble cadena generalmente no es lo suficientemente sensible como para detectar ARN de doble cadena formado en una infección por el virus del ARN de sentido negativo. Por lo tanto, la interacción entre el ARN de doble cadena y los receptores de reconocimiento del patrón huésped ha permanecido en gran medida esquiva para estos virus. Utilizando este protocolo somos capaces de visualizar y caracterizar la interacción entre la proteína nuclear viral, el ARN de doble cadena y albergar un PRR a un nivel de una sola célula para el virus del ARN de sentido negativo. Este es un ensayo multiplex que permite la tinción simultánea de ARN de doble cadena y dos dianas de proteína viral o huésped en células individuales. A diferencia del ensayo ARN-FISH, esta técnica es independiente de la secuencia de ARN y generalmente compatible con la detección de anticuerpos de dianas proteicas. Comience 24 horas antes de la infección sembrando 200.000 células A549 epiteliales pulmonares humanas sobre la cubierta de vidrio recubierto de Poli-D-Lisina en placas de 12 pocillos y creyendo en 37