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Imágenes y análisis de fluorescencia resueltos en el tiempo de la invasión de células cancerosas ...
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JoVE Journal Biology
Time-Resolved Fluorescence Imaging and Analysis of Cancer Cell Invasion in the 3D Spheroid Model

Imágenes y análisis de fluorescencia resueltos en el tiempo de la invasión de células cancerosas en el modelo esferoide 3D

Full Text
6,976 Views
07:42 min
January 30, 2021

DOI: 10.3791/61902-v

Louisiane Perrin1, Theodore Tucker1, Bojana Gligorijevic1,2

1Bioengineering Department,Temple University, 2Cancer Biology Program,Fox Chase Cancer Center

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a protocol for the fabrication of a spheroid imaging device, enabling dynamic and longitudinal fluorescence imaging of cancer cell spheroids to investigate mechanisms of cell invasion in real-time. The technique demonstrates enhanced efficiency and cost-effectiveness for modeling solid tumor invasiveness.

Key Study Components

Research Area

  • Cancer biology
  • Cell invasion dynamics
  • Imaging techniques

Background

  • Invasion of cancer cells into the extracellular matrix is crucial for understanding metastasis.
  • Current methods often lack efficiency and scalability for high-throughput applications.
  • Imaging spheroids can provide insights into cellular behaviors in a more biologically relevant context.

Methods Used

  • 3D printing and PDMS fabrication for spheroid imaging device
  • Cancer cell spheroids of mammary carcinoma
  • Longitudinal fluorescence imaging

Main Results

  • The protocol successfully enables real-time imaging of cancer cell invasion.
  • Embedding spheroids in collagen facilitated longitudinal studies of invasion over six days.
  • Image processing procedures were validated for analyzing spheroid area and morphology over time.

Conclusions

  • This study validates a novel spheroid imaging technique with potential applications in cancer research.
  • The findings emphasize the importance of real-time monitoring in understanding cancer cell dynamics.

Frequently Asked Questions

What is a spheroid imaging device?
A device designed to enable dynamic imaging of cancer cell spheroids, facilitating studies of invasion and cellular dynamics.
How is the device built?
It involves 3D printing a spacer, mixing PDMS, and curing it between glass plates to create the imaging inserts.
What types of cells can be studied?
While demonstrated with mammary carcinoma, the assay is adaptable for various solid tumors.
What are the main benefits of this method?
It improves experimental efficiency, reduces costs, and allows for enhanced real-time monitoring of cell behavior.
How long can spheroids be imaged?
Spheroids can be imaged longitudinally over an extended period, as tested over six days in this study.
Can the technique be used for other biological applications?
Yes, the method can be adapted for various research applications focused on cell invasion and behavior.
Is image processing required?
Yes, the protocol includes a simple image processing procedure to analyze spheroid invasion quantitatively.

Aquí se presenta un protocolo para la fabricación de un dispositivo de imágenes esferoides. Este dispositivo permite imágenes dinámicas o longitudinales de fluorescencia de esferoides de células cancerosas. El protocolo también ofrece un procedimiento simple de procesamiento de imágenes para el análisis de la invasión de células cancerosas.

Este protocolo se puede utilizar para estudiar los mecanismos que rigen la invasión de las células cancerosas en la matriz extracelular en tiempo real. La principal ventaja de esta técnica es que utiliza un simple dispositivo de imágenes esferoides, lo que hace que el ensayo de invasión esferoide sea más fácil de configurar y mejora su eficiencia y costo. Si bien demostramos el uso del ensayo de invasión esferoide para modelar el carcinoma mamario, este ensayo es un excelente modelo para la invasión de cualquier tumor sólido en el tejido sano circundante.

Después de la impresión 3D del espaciador, pondere una relación de 10:1 de polímero base a enlazador cruzado en una taza de plástico y utilice una pipeta desechable para mezclar a fondo la solución PDMS resultante en la taza. Coloque la taza en una cámara de vacío y suelte rápidamente la presión de vacío para eliminar cualquier aire atrapado en la superficie de la mezcla y disipar las burbujas de aire restantes. Incubar el espaciador impreso en 3D a 100 grados Celsius durante cinco minutos para aumentar su flexibilidad y limpiar dos placas de vidrio con 100% isopropanol.

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