Visualización de la motilidad bacteriana basada en una reacción de color

La detección de la motilidad bacteriana es importante porque la motilidad es crucial para la patogenicidad. El protocolo aquí descrito es un método fiable para la detección de la motilidad bacteriana, ya que se basa en la reacción de color de la TTC con las deshidrogenasas intracelulares de las bacterias vivas. El método de agar semisólido TTC para detectar la motilidad bacteriana es simple, fácil de operar y no involucra instrumentos grandes y costosos.

El método puede ser utilizado por microbiólogos clínicos o investigadores para investigar bacterias patógenas. La demostración del procedimiento estará a cargo de Xiyi Zhuang, un experimentador senior de mi laboratorio. Para comenzar, prepare el medio semisólido tradicional agregando 10 gramos de Triptosa, 15 gramos de cloruro de sodio y cuatro gramos de agar en un volumen adecuado de agua destilada.

Ajuste el pH a 7,2 y componga el volumen final a 1.000 mililitros. Esterilizar el medio en autoclave a 121 grados centígrados durante 20 minutos y dispensar el medio en tubos de ensayo de 10 mililitros a una altura de tres centímetros. Para preparar el medio TTC, enfríe el medio tradicional esterilizado en autoclave a 50 grados centígrados y luego agregue cinco mililitros de solución estéril de TTC al 1% a 100 mililitros de medio.

Mezcle y dispense el medio en tubos de ensayo de 10 mililitros a una altura de tres centímetros. Recoger colonias individuales de bacterias de placas de agar e inocularlas en ambos medios semisólidos mediante punción con agujas de inoculación. Recuerde incluir las deformaciones no modales como controles negativos y las deformaciones modales como controles positivos.

Para observar el efecto de la concentración de agar sobre la motilidad bacteriana, prepare medios semisólidos que contengan diferentes concentraciones de agar e inoculelos por punción. Incubar los tubos a 37 grados centígrados y observar los resultados después de 24 a 48 horas de incubación. Si solo la línea de punción es roja, caracterice las bacterias como no modales.

Si el color rojo se extiende hacia afuera a lo largo de la línea de punción, caracterice las bacterias como modales. La motilidad bacteriana se comparó para varias cepas en medios semisólidos tradicionales y TTC y se resumió en esta tabla. Después de un cultivo de 24 horas en medio semisólido TTC, Staphylococcus aureus mostró crecimiento a lo largo de la línea inoculada.

Mientras que, Escherichia coli mostró crecimiento en todas las direcciones alrededor de la línea inoculada. La mayor motilidad para Escherichia coli se observó en el medio semisólido TTC preparado con agar al 0,3% en el que el medio se volvió casi completamente rojo. En contraste, el área de difusión de rojo disminuyó en agar 0.5% y la difusión se prolongó con aumento de la concentración de agar a 0.8%Es importante ajustar el pH a 7.2 y enfriar el medio esterilizado en autoclave a 50 grados centígrados antes de la inoculación usando las agujas.

Las bacterias deben inocularse por punción en el medio semisólido que contiene TTC. Es un método directo para detectar la motilidad bacteriana. También es posible detectar la motilidad indirectamente mediante microscopio electrónico y