Instilación intratraqueal no invasiva de lipopolisacáridos en ratones

Nuestro protocolo propone un nuevo método de administración no invasivo de LPS desde la tráquea hasta el pulmón, con mayor precisión. Las personas que están probando este método por primera vez deben poner mucho esfuerzo en encontrar la posición de la tráquea. Para preparar la plataforma de intubación, pase la cuerda a través de los dos orificios y ate sus extremos a las pequeñas protuberancias en la parte superior del elevador.

Luego, coloque dos bandas elásticas en cada extremo del clip y péguelas con cinta adhesiva a la parte posterior del elevador. Finalmente, fije el elevador a la base en un ángulo de 90 grados. Ensamble la cánula en una cánula y encienda la luz de la pluma.

A continuación, desinfecte las pinzas quirúrgicas pequeñas y la pipeta Pasteur con alcohol al 70%. Para preparar la solución del compuesto de prueba, agregue tres miligramos de lipopolisacárido, o LPS, en un mililitro de pH 7.2 PBS. Luego, disuelva 10 miligramos de pentobarbital sódico en un mililitro de solución salina normal y filtre la solución con un filtro de jeringa de 0.45 micrómetros.

Coloque el ratón anestesiado en la plataforma de intubación. Luego fije los dientes frontales superiores con la cuerda y los dos antepiés con las bandas elásticas. Usando pinzas, saque la lengua y sosténgala.

Empuje la cánula lentamente a lo largo de la boca hasta la epiglotis mandibular. Localice la tráquea con la luz de la cánula e inserte lentamente la cánula en ella. Luego retire la pluma de intubación, dejando la cánula dentro.

Inserte la pipeta Pasteur en la junta de la cánula y presione el cabezal. Después de una intubación endotraqueal exitosa, usando una microjeringa de cabeza plana, instilar la solución de LPS preparada a una dosis de tres miligramos por kilogramo a través de la cánula. Una vez terminado, saca la microjeringa y la cánula.

Retire el ratón de la plataforma de intubación y colóquelo en una jaula separada para recuperarse. Observar el estado respiratorio del ratón hasta que se recupere y recupere la conciencia. A las 12 horas después de la instilación traqueal LPS, se evaluó la expresión de una citoquina inflamatoria, TNF-alfa, y la relación pulmón seco-peso húmedo y se compararon con otros métodos de instilación.

Los niveles séricos de TNF-alfa en el grupo de intubación orofaríngea no invasiva aumentaron significativamente en comparación con el grupo control en blanco. La relación pulmón de peso seco-húmedo también aumentó, alcanzando el mismo nivel que en el grupo de intubación traqueal quirúrgica. Es importante no rayar la tráquea en el proceso de encontrar la ubicación de la tráquea.

La técnica también podría usarse para administrar otros medicamentos que necesitan llegar al pulmón de una manera no invasiva.