Ex Vivo Cultivo de células tumorales circulantes en el líquido cefalorraquídeo de pacientes con melanoma para estudiar la enfermedad leptomeníngea asociada al melanoma
March 29th, 2024
En este artículo se describe un protocolo para la propagación de células tumorales circulantes por líquido cefalorraquídeo (CTC-LCR) recolectadas de pacientes con enfermedad leptomeníngea asociada a melanoma (M-LMD) para desarrollar modelos preclínicos para estudiar la M-LMD.
La enfermedad leptomeníngea por melanoma o MLMD es una forma agresiva de metástasis de las meninges, donde las células tumorales circulantes o CTC se infiltran en el líquido cefalorraquídeo. Lamentablemente, no existen tratamientos efectivos para el MLMD, por lo que comprender su biología ayudará a desarrollar terapias para reducir la mortalidad. Informes recientes han demostrado cómo las CTC pueden colonizar el entorno del LCR cicatrizado por nutrientes, como la utilización de la capacidad de eliminación de hierro para mejorar su supervivencia y complementar C3 para promover la invasión al líquido cefalorraquídeo a través del plexo coroideo.
Por lo tanto, los CTC son muy buenas herramientas para estudiar el MLMD. El mayor desafío en el estudio de las CTC en LCR es la falta general de un modelo preclínico y la escasez de estas células. Encontrar formas de cultivar estas células raras y frágiles a partir de pacientes y generar un modelo de xenoinjerto beneficiará enormemente a los investigadores en la comprensión de la patología MLMD y en el diseño de terapias racionales.
Hemos desarrollado un método que propaga con éxito CTC de LCR de pacientes con MLMD in vitro e in vivo, lo que nos proporcionó la capacidad de realizar análisis moleculares y funcionales de células MLMD, así como estudios de eficacia en modelos de xenoinjertos. Aunque las metodologías actuales son imperfectas, el hecho de poder cultivar y expandir las CTC del LCR de pacientes con melanoma por primera vez, nos dio una idea de la importancia de comprender los microambientes del LCR.
Visión general
Este artículo describe un protocolo para la propagación de células tumorales circulantes en el líquido cefalorraquídeo (CSF-CTC) recolectadas de pacientes con enfermedad leptomeníngea asociada a melanoma (M-LMD) para desarrollar modelos preclínicos para estudiar la M-LMD.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Oncología
- Biología celular
Antecedentes
- La enfermedad leptomeníngea por melanoma (M-LMD) es una forma grave de metástasis.
- Las CTC se infiltran en el líquido cefalorraquídeo, complicando las opciones de tratamiento.
- Comprender la biología de las CTC es crucial para desarrollar terapias efectivas.
- Las metodologías actuales para estudiar las CTC en el LCR son limitadas.
Propósito del estudio
- Propagar las CTC del LCR de pacientes con M-LMD.
- Generar modelos preclínicos para estudiar la patología de la M-LMD.
- Facilitar análisis moleculares y funcionales de las células M-LMD.
Métodos utilizados
- Pre-revestimiento de matraces T175 con poli-L-lisina para cultivo celular.
- Uso de células meníngeas humanas para crear medio acondicionado.
- Centrifugación y procesamiento de muestras de líquido cefalorraquídeo.
- Establecimiento de modelos de xenoinjerto en ratones inmunodeficientes.
Resultados principales
- Propagación exitosa de CTC del LCR in vitro e in vivo.
- Conocimientos adquiridos sobre el papel del microambiente del LCR en la supervivencia de las CTC.
- Identificación de factores de crecimiento que mejoran el cultivo de CTC.
- Desarrollo de una metodología para estudiar la M-LMD de manera efectiva.
Conclusiones
- La propagación de las CTC del LCR proporciona una herramienta valiosa para la investigación de la M-LMD.
- Comprender la biología de las CTC puede conducir a nuevas estrategias terapéuticas.
- Se necesita un mayor perfeccionamiento de las metodologías para obtener resultados óptimos.
Preguntas frecuentes
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:36
Preparation of Human Meningeal Cell (HMC) Conditioned Media and Collection of Cerebrospinal Fluid for the Culture of Circulating Tumor Cells
3:23
In Vitro Culture and Expansion of Cerebro Spinal Fluid (CSF)-Circulating Tumor Cells (CTCs) for the Study of Leptomeningeal Disease
4:24
CSF Collection from Mice with Leptomeningeal Disease for Subsequent Clone Expansion
