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DOI: 10.3791/66889-v
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Aquí se describe un método que se puede utilizar para obtener imágenes de cinco o más parámetros fluorescentes mediante microscopía inmunofluorescente. Se describe una línea de análisis para extraer células individuales de estas imágenes y realizar análisis de células individuales a través de estrategias de compuerta similares a la citometría de flujo, que pueden identificar subconjuntos de células en secciones de tejido.
Nuestro objetivo general es estudiar cómo las células del sistema inmunitario y las células gliales del sistema nervioso central contribuyen al desarrollo y la progresión de trastornos neurológicos como la esclerosis múltiple. La microscopía inmunofluorescente es una técnica estándar y ampliamente utilizada en todas las disciplinas biológicas y es esencial para la investigación en neurociencia e inmunología. Uno de los principales problemas que aquejan a los investigadores es que la microscopía inmunofluorescente suele estar limitada en el número de sondas que se pueden obtener a la vez debido a las limitaciones de los microscopios convencionales.
En este protocolo, describimos un método para expandir el número de sondas que muchos microscopios pueden obtener imágenes a la vez, y proporcionamos una canalización de análisis para procesar imágenes densas en información. La ventaja de este protocolo es que se puede adaptar a muchos microscopios ampliamente disponibles y es fácil de ejecutar, lo que haría que el análisis histológico multiplexado estuviera disponible para un mayor número de laboratorios.
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