Identificación de células T raras específicas de antígeno de pulmones de ratón con tetrámeros del complejo de histocompatibilidad peptídico:principal

Proporcionamos un protocolo detallado para aislar e identificar poblaciones de células T específicas de antígenos raros en pulmones de ratón a través del enriquecimiento de células T basado en perlas magnéticas y tetrámeros del complejo de histocompatibilidad mayor (MHC) de péptidos.

Nuestro laboratorio estudia el desarrollo de linfocitos T CD4 en diferentes contextos de tolerancia e inmunidad. A lo largo de nuestros proyectos, estamos interesados principalmente en cómo la exposición a antígenos impulsa el desarrollo de subconjuntos fenotípicos de células T que establecen una memoria inmunitaria que puede mejorar la tolerancia a sí misma o la inmunidad contra patógenos. Recientemente, nos hemos centrado en el desarrollo de subconjuntos de células T reguladoras y de memoria que residen en el tejido pulmonar.

Estas células T residentes en el tejido desempeñan un papel importante en el refuerzo de la tolerancia a los autoantígenos durante la lesión tisular o en la promoción de respuestas inflamatorias a los patógenos durante la reinfección. Nuestro laboratorio se especializa en el estudio directo de células T específicas de antígeno, pero reactivos de tetrámero MHC de péptidos personalizados. Esto nos permite estudiar estas células T sin el uso de modelos transgénicos TCR u otras manipulaciones experimentales que se sabe que causan artefactos experimentales.

Aunque podemos identificar fácilmente las células T específicas de antígeno con tetrámeros, estas células T a menudo están presentes en frecuencias muy bajas, particularmente cuando se encuentran en un estado ingenuo o de memoria. También es difícil aislar estas células T de los tejidos no linfoides, donde a menudo residen después de una respuesta inmunitaria. Si bien existen varios protocolos establecidos para aislar células T de pulmones de ratón, el protocolo que presentamos aquí se ha optimizado para la detección posterior de células T específicas de antígeno de baja frecuencia mediante tinción de tetrámeros.

Dentro de este protocolo, también hemos incluido dos opciones de asociación de tejidos para acomodar mejor los recursos de la biblioteca. Nuestro protocolo ayudará a los investigadores a expandir el uso de tetrámeros a las células T específicas de antígeno en el tejido pulmonar. Esto conducirá a estudios in vivo más potentes del desarrollo y la función de las células T de memoria de los tejidos residentes, que son temas de gran interés en el campo.