El laboratorio flotante: procedimiento operativo estándar para recolectar y filtrar muestras de agua de mar de transbordadores operativos para análisis de ADN ambiental

El objetivo de nuestra investigación es el estudio de las comunidades biológicas en alta mar utilizando buques comerciales como plataforma para la recogida de muestras de ADN ambiental. En nuestro caso específico, la atención se centra en los cetaecans. Trate de identificar áreas en alta mar, ecológicamente estratégicas para su protección. Si bien la adquisición de muestras de EDNA es extremadamente fácil, solo recolectando muestras de agua de mar, y aunque la tecnología analítica está en constante progreso, el verdadero desafío es cómo llegar a los entornos a monitorear, especialmente cuando estos son de difícil acceso, como en el caso de las aguas marinas de aguas profundas. Si bien el EDNA se está convirtiendo con frecuencia en la técnica electiva para el estudio del medio ambiente marino, faltan protocolos que permitan un procesamiento fácil y reproducible de muestras de gran volumen en el campo. A medida que el EDNA se degrada en un lapso de tiempo, es fundamental filtrar y almacenar muestras de EDNA de agua de mar después de la recolección para garantizar la máxima recuperación y eficiencia. El protocolo presentado se basa completamente en la operación de transbordadores para la recopilación de datos. El monitoreo basado en ferry ofrece varias ventajas, como la repetibilidad, las carreteras son constantes y funcionan durante todo el año, lo que permite el monitoreo estacional, el fácil acceso a las aguas marinas, la realización de una recolección de muestras libre de emisiones, lo que hace posible el muestreo también durante las horas nocturnas y, finalmente, reduce drásticamente los costos de muestreo. Usando este protocolo, recolectamos y filtramos una gran cantidad de muestras, llegando a áreas remotas y en alta mar, lo que permitió una mayor resolución espacial para nuestra investigación. Esto es especialmente relevante ya que nos dirigimos a organismos marinos que viven en mar abierto, es decir, mamíferos marinos. ¿La información obtenida de su EDNA podría arrojar luz sobre su distribución, preferencia de hábitat y, en última instancia, estado de conservación?

[Narrador] Para comenzar, anote la velocidad de crucero actual o promedio del ferry en la ruta para estimar la extensión del tramo de muestreo. Después de desinfectar la superficie filtrante, abra ligeramente el grifo de recolección de muestras durante la duración del crucero. Utilice el flujo continuo de agua de mar para enjuagar la tubería de recolección con agua local y eliminar el exceso de agua en la sentina. Utilice un marcador permanente para etiquetar el dorsal con los detalles requeridos. Retire la película del techo de la abertura del BIB y llénela con aproximadamente 13 litros de agua de mar. Cuando el BIB esté casi lleno, retire la película del techo de la tapa, dejando intacta la película alrededor del grifo. Después de sellar herméticamente el BIB, anote la hora exacta en que se completa la recolección de la muestra y registre la duración total de la recolección de la muestra. Escriba el tiempo de finalización en el BIB con un marcador permanente y transfiera la información al formulario de recolección y filtración de muestras. Coloque el BIB lleno en la sala de almacenamiento o área de filtración. Para preparar la estación de filtrado, conecte la bomba de vacío a la boquilla de succión del matraz de vacío y coloque el tapón con el soporte en el cuello del matraz para acomodar el cilindro de filtración. Prepare todos los materiales necesarios y ensamble el sistema de filtrado en el espacio designado para la filtración. Use un cilindro nuevo para cada estación y un nuevo par de pinzas de un solo uso o pinzas esterilizadas. Para minimizar el riesgo de contaminación, coloque una funda aislante, como una bolsa de plástico, entre el grifo y el cilindro de filtración para aislar el flujo de agua. Active la bomba de vacío e inicie el temporizador para registrar el tiempo de filtración. Pase hasta cuatro litros de agua por filtro, asegurando que el cilindro permanezca lleno durante todo el proceso para evitar la entrada de aire. Cuando el agua filtrada alcance la marca de cuatro litros, apague la bomba de vacío y detenga el temporizador inmediatamente. Registre el tiempo de filtrado en la hoja de registro de datos. A continuación, utiliza unas pinzas para recuperar con cuidado el primer filtro o filtro a del cilindro, evitando cualquier daño. Lo doblé por la mitad con el lado que retiene el material biológico doblado hacia adentro y lo envolví en papel de aluminio. Etiquete el papel de aluminio con el número de muestra y filtre la identificación de la réplica antes de guardarlo en el congelador. Monte un filtro nuevo dentro del cilindro de filtración para la siguiente ronda de filtración y vacíe el matraz. Después de la filtración. Almacene todos los filtros entre menos cuatro grados Celsius y menos 20 grados Celsius hasta su posterior procesamiento en laboratorio. Justo antes del desembarco, recupere todas las muestras y colóquelas en refrigeradores transportables a baja temperatura para su transporte. La recolección y el análisis de ADN ambiental marino mediante recubrimiento de metabarras identificaron múltiples especies de vertebrados, incluidos los blanquillos, Alas Brinks y los cetáceos a lo largo de la ruta muestreada, lo que permitió la reconstrucción de la composición de la comunidad de vertebrados y la estructura trófica.