Name: Perfilado de O-glicanos de mucina permetilada mediante espectrometría de masas de tiempo de vuelo de desorción/ionización láser asistida por matriz (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 51 s
Description: Aprende a analizar O-glicanos de mucina mediante espectrometría de masas MALDI-TOF. Este protocolo de alto rendimiento permite estudiar interacciones huésped-microbio en el tracto gastrointestinal.

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<ol><li>Bergstrom, K. S. B., Xia, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucin-type+O-glycans+and+their+roles+in+intestinal+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">Mucin-type O-glycans and their roles in intestinal homeostasis.</a> Glycobiology. 23 (9), 1026-1037 (2013).</li>
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<li>Vos, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+release+of+O-glycans+under+neutral+conditions+for+analysis+of+glycoconjugates+having+base-sensitive+substituents%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Oxidative release of O-glycans under neutral conditions for analysis of glycoconjugates having base-sensitive substituents.</a> Anal Chem. 95 (23), 8825-8833 (2023).</li>
<li>Furuki, K., Toyo'oka, T., Ban, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+sensitive+glycosylamine+labelling+of+O-glycans+using+non-reductive+%CE%B2-elimination%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Bioanal+Chem%22%5BJournal%5D)">Highly sensitive glycosylamine labelling of O-glycans using non-reductive β-elimination.</a> Anal Bioanal Chem. 409 (9), 2269-2283 (2017).</li>
<li>Miura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycoblotting-assisted+O-glycomics%3A+ammonium+carbamate+allows+for+highly+efficient+o-glycan+release+from+glycoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22Analy+Chemi%22%5BJournal%5D)">Glycoblotting-assisted O-glycomics: ammonium carbamate allows for highly efficient o-glycan release from glycoproteins.</a> Analy Chemi. 82 (24), 10021-10029 (2010).</li>
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<li>Hu, Y., Borges, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spin+column-free+approach+to+sodium+hydroxide-based+glycan+permethylation%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">A spin column-free approach to sodium hydroxide-based glycan permethylation.</a> Analyst. 142 (15), 2748-2759 (2017).</li>
<li>Ceroni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GlycoWorkbench%3A+a+tool+for+the+computer-assisted+annotation+of+mass+spectra+of+glycans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">GlycoWorkbench: a tool for the computer-assisted annotation of mass spectra of glycans.</a> J Proteome Res. 7 (4), 1650-1659 (2008).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Pipetas pasteur de vidrio de 150 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>15202699</td><td>Consumibles Referencia en el texto (si procede): pipeta de vidrio</td></tr><tr><td>Tubos de 5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30122305</td><td>Consumibles</td></tr><tr><td>Placa de extracción HLB de 96 pozos</td><td>Fisher Scientific</td><td>16553290</td><td>Consumibles</td></tr><tr><td>ácido acético</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6283</td><td>Reactivo</td></tr><tr><td>acetonitrilo</td><td>Fisher Scientific</td><td>15624520</td><td>Reactivo</td></tr><tr><td>DMSO anhidro</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5.89569</td><td>Reactivo</td></tr><tr><td>Metanol anhidro</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5.89596</td><td>Reactivo</td></tr><tr><td>Espectrómetro de masas Autoflex</td><td>Bruker</td><td></td><td>Equipo</td></tr><tr><td>DOWEX 50w x8 resina, forma H+, malla 200-400</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>44519</td><td>Reactivo Referencia en el texto (si procede): resina de intercambio catiónico</td></tr><tr><td>Calefactor de bloque seco</td><td>Subvención</td><td>QBD2</td><td>Equipo</td></tr><tr><td>Evaporador/Concentrador para calentadores de bloque</td><td>Cole-Palmer</td><td>WZ-36610-99</td><td>Equipo</td></tr><tr><td>flexAnalysis</td><td>Bruker</td><td></td><td>Software, propietario&nbsp;</td></tr><tr><td>flexControl</td><td>Bruker</td><td></td><td>Software, propietario&nbsp;</td></tr><tr><td>Genevac EZ-2</td><td>Biofarmacéutica</td><td>EZ-2</td><td>Equipamiento Referencia en el texto (si procede): evaporador centrífugo</td></tr><tr><td>viales de vidrio con tapas de PTFE a juego (4 mL)</td><td>Wheaton</td><td>DWKW224582-144EA</td><td>Consumibles</td></tr><tr><td>viales de vidrio con tapas de PTFE a juego (8 mL)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11587413</td><td>Consumibles</td></tr><tr><td>lana de vidrio</td><td>Supelco</td><td>1.04086</td><td>Consumibles</td></tr><tr><td>Banco de trabajo de glucosa</td><td>NA</td><td></td><td>Software; descargable desde https://glycoworkbench.software.informer.com/</td></tr><tr><td>Cartuchos HLB SPE</td><td>Supelco</td><td>57493-U</td><td>Consumible, como alternativa a la placa de extracción HLB de 96 pozos</td></tr><tr><td>Iodometano</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>289566</td><td>Reactivo</td></tr><tr><td>Placa objetivo MALDI</td><td>Bruker</td><td></td><td>Equipo</td></tr><tr><td>Liofilizador ModulyoD</td><td>Thermo Fisher</td><td>ModulyoD-230</td><td>Equipamiento Referencia en el texto (si procede): liofilizadora</td></tr><tr><td>NaBH4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>452882</td><td>Reactivo</td></tr><tr><td>Pellets NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>567530</td><td>Reactivo</td></tr><tr><td>Solución NaOH 50%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>415413</td><td>Reactivo</td></tr><tr><td>Procesador de presión positiva-96</td><td>Aguas</td><td>186006961</td><td>Equipo</td></tr><tr><td>super DHB</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>50862</td><td>Reactivo</td></tr><tr><td>Ácido trifluoroacético</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6508</td><td>Reactivo</td></tr></tbody></table>

perfilado de o-glicanos de mucina permetilada mediante espectrometría de masas de tiempo de vuelo de desorción/ionización láser asistida por matriz

Profiling of Permethylated Mucin O-glycans Using Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry

Perfilado de O-glicanos de mucina permetilada mediante espectrometría de masas de tiempo de vuelo de desorción/ionización láser asistida por matriz

Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) is a powerful tool for the profiling of mucin glycans that ...

profiling-permethylated-mucin-o-glycans-using-matrix-assisted-laser

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Una manera rápida se describe para obtener información sobre la estructura de los polisacáridos en una matriz extracelular. El método tiene la ventaja de la especificidad de glycosylhydrolases y la sensibilidad de la espectrometría de masas permite pequeñas cantidades de materiales para ser analizados. Esta técnica se puede adaptar para utilizarse directamente sobre el tejido en sí.

Oligo perfiles Misa (OLIMP) de polisacáridos extracelulares

Un método específico y sensible para profundizar en el perfil de expresión de los antígenos de glucoesfingolípidos en órganos y células inmunes se describe. El método se aprovecha de la espectrometría de masas de iones trampa permitiendo paso a paso fragmentación de las moléculas de glucoesfingolípidos para el análisis estructural, en comparación con los estándares de síntesis química.

Análisis espectrométrico de masas de Antígenos glicoesfingolípido

Con el fin de explorar exhaustivamente la diversidad de glicanos ligados a O, se aplica un nuevo procedimiento para la eliminación de β reductor en gel, combinado con permetilación y un método rápido de partición de fase, al análisis de glicanos ligados a O liberados directamente de glicoproteínas resueltas por SDS-PAGE y susceptibles de análisis glicómico posterior por espectrometría de masas.

Mejora En-gel β-eliminación para ligada al O y exhaustiva sulfo-glycomics reductoras de Espectrometría de Masas

Este protocolo describe las técnicas específicas utilizadas para la caracterización estructural de las secuencias reductoras de glicosil extremo (RE) e interno de los heteroxilanos mediante el marcaje del RE con 2 aminobenzamida antes de la hidrólisis enzimática (endoxilanasa) y luego el análisis de los oligosacáridos resultantes mediante espectrometría de masas (MS) y resonancia magnética nuclear (RMN).

La secuenciación de pared planta heteroxilanos Usando enzimática, química (metilación) y (espectrometría de masas, resonancia magnética nuclear) Técnicas Físicas

Este artículo presenta una forma mejorada de una novedosa técnica glicómica de abajo hacia arriba diseñada para analizar el perfil composicional agrupado de glicanos en biofluidos no fraccionados a través de la descomposición química de los glicanos en sus monosacáridos específicos de enlace constituyente para su detección por GC-MS. Las aplicaciones potenciales incluyen la detección temprana del cáncer y otros trastornos afectivos de los glicanos.

El análisis de glicanos Nodo: un enfoque de abajo hacia arriba para Glicómica

Un protocolo para el tiempo de ionización desorción láser asistida por matriz de caracterización de la espectrometría de masas (MALDI-TOF MS) de los polímeros sintéticos se describe como la optimización de la preparación de muestras, adquisición espectral y análisis de datos de vuelo.

Caracterización de polímeros sintéticos vía matriz asistida por láser desorción de ionización tiempo de vuelo (MALDI-TOF) espectrometría de masas

La proteína arginina (R)-metilación es una modificación postraduccional muy extendida que regula múltiples vías biológicas. La espectrometría de masas es la mejor tecnología para perfilar globalmente el R-metil-proteoma, cuando se combina con enfoques bioquímicos para el enriquecimiento peptídico modificado. El flujo de trabajo diseñado para la identificación de alta confianza de la R-metilación global en células humanas se describe aquí.

Un enfoque proteómico basado en espectrometría de masas para el análisis global y de alta confianza de la proteína R-metilación

El perfil de polímeros de microarrays (MAPP) es una técnica de alto rendimiento para el análisis de la composición de glicanos en muestras biológicas.

Perfil de polímeros de microarrays (MAPP) para análisis de glicanos de alto rendimiento

Este protocolo detalla el método de glicoproteómica guiada por glucómicos, una tecnología ómica integrada que ofrece información completa sobre el glicoproteoma heterogéneo en microambientes tumorales complejos necesarios para comprender mejor la glicobiología de los cánceres.

La glicoproteómica guiada por glucómica facilita el perfil completo del glicoproteoma en microambientes tumorales complejos 

Se presenta un protocolo para perfiles metabólicos de muestras biológicas mediante electroforesis capilar de espectrometría de masas utilizando un diseño de interfaz de punta porosa sheathless.

Sheathless electroforesis capilar-espectrometría de masas de perfiles metabólicos de muestras biológicas

Aprende a analizar O-glicanos de mucina mediante espectrometría de masas MALDI-TOF. Este protocolo de alto rendimiento permite estudiar interacciones huésped-microbio en el tracto gastrointestinal.

Perfilado de O-glicanos de mucina permetilada mediante espectrometría de masas de tiempo de vuelo de desorción/ionización láser asistida por matriz (Video) | JoVE Journal

Perfilado de O-glicanos de mucina permetilada mediante espectrometría de masas de tiempo de vuelo de desorción/ionización láser asistida por matriz

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