Name: Análisis de subpoblaciones de plaquetas mediante citometría de flujo multicolor (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Aprende citometría de flujo multicolor para identificar subpoblaciones plaquetarias y analizar patrones de activación con diferentes agonistas. Este método avanza la comprensión de la función plaquetaria en trombosis.

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<ol><li>Freedman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+platelet-dependent+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of platelet-dependent thrombosis.</a> Circulation. 112 (17), 2725-2734 (2005).</li>
<li>Koupenova, M., Kehrel, B. E., Corkrey, H. A., Freedman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombosis+and+platelets%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Thrombosis and platelets: an update.</a> Eur Heart J. 38 (11), 785-791 (2016).</li>
<li>van der Meijden, P. E. J., Heemskerk, J. W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+biology+and+functions%3A+new+concepts+and+clinical+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Platelet biology and functions: new concepts and clinical perspectives.</a> Nat Rev Cardiol. 16 (3), 166-179 (2019).</li>
<li>Li, Z., Delaney, M. K., O'Brien, K. A., Du, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+During+Platelet+Adhesion+and+Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscl+Thrombosis+Vas+Biol%22%5BJournal%5D)">Signaling During Platelet Adhesion and Activation.</a> Arterioscl Thrombosis Vas Biol. 30 (12), 2341-2349 (2010).</li>
<li>Oishi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+activates+platelets+and+exacerbates+rhabdomyolysis-induced+acute+kidney+injury+via+CLEC-2+and+GPVI%2FFcRgamma%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Adv%22%5BJournal%5D)">Heme activates platelets and exacerbates rhabdomyolysis-induced acute kidney injury via CLEC-2 and GPVI/FcRgamma.</a> Blood Adv. 5 (7), 2017-2026 (2021).</li>
<li>Bourne, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+induces+human+and+mouse+platelet+activation+through+C-type-lectin-like+receptor-2%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Heme induces human and mouse platelet activation through C-type-lectin-like receptor-2.</a> Haematologica. 106 (2), 626-629 (2021).</li>
<li>Rohlfing, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cGMP+modulates+hemin-mediated+platelet+death%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">cGMP modulates hemin-mediated platelet death.</a> Thromb Res. 234, 63-74 (2024).</li>
<li>Chu, Y., Guo, H., Zhang, Y., Qiao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procoagulant+platelets%3A+Generation%2C+characteristics%2C+and+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Lab+Anal%22%5BJournal%5D)">Procoagulant platelets: Generation, characteristics, and therapeutic target.</a> J Clin Lab Anal. 35 (5), e23750(2021).</li>
<li>Sodergren, A. L., Ramstrom, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+subpopulations+remain+despite+strong+dual+agonist+stimulation+and+can+be+characterised+using+a+novel+six-colour+flow+cytometry+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Platelet subpopulations remain despite strong dual agonist stimulation and can be characterised using a novel six-colour flow cytometry protocol.</a> Sci Rep. 8 (1), 1441(2018).</li>
<li>Agbani, E. O., Poole, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procoagulant+platelets%3A+generation%2C+function%2C+and+therapeutic+targeting+in+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Procoagulant platelets: generation, function, and therapeutic targeting in thrombosis.</a> Blood. 130 (20), 2171-2179 (2017).</li>
<li>Agbani, E. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinated+Membrane+Ballooning+and+Procoagulant+Spreading+in+Human+Platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Coordinated Membrane Ballooning and Procoagulant Spreading in Human Platelets.</a> Circulation. 132 (15), 1414-1424 (2015).</li>
<li>Heemskerk, J. W., Mattheij, N. J., Cosemans, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-based+coagulation%3A+different+populations%2C+different+functions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Platelet-based coagulation: different populations, different functions.</a> J Thromb Haemost. 11 (1), 2-16 (2013).</li>
<li>Rukoyatkina, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifaceted+effects+of+arachidonic+acid+and+interaction+with+cyclic+nucleotides+in+human+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Multifaceted effects of arachidonic acid and interaction with cyclic nucleotides in human platelets.</a> Thromb Res. 171, 22-30 (2018).</li>
<li>Taylor, M. L., Misso, N. L. A., Stewart, G. A., Thompson, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Expression+of+Platelet+Activation+Markers+CD62P+and+CD63+Following+Stimulation+with+PAF%2C+Arachidonic+Acid+and+Collagen%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">Differential Expression of Platelet Activation Markers CD62P and CD63 Following Stimulation with PAF, Arachidonic Acid and Collagen.</a> Platelets. 6 (6), 394-401 (1995).</li>
<li>van Velzen, J. F., Laros-van Gorkom, B. A., Pop, G. A., van Heerde, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicolor+flow+cytometry+for+evaluation+of+platelet+surface+antigens+and+activation+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Multicolor flow cytometry for evaluation of platelet surface antigens and activation markers.</a> Thromb Res. 130 (1), 92-98 (2012).</li>
<li>Hindle, M. S., Spurgeon, B. E. J., Cheah, L. T., Webb, B. A., Naseem, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multidimensional+flow+cytometry+reveals+novel+platelet+subpopulations+in+response+to+prostacyclin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Multidimensional flow cytometry reveals novel platelet subpopulations in response to prostacyclin.</a> J Thromb Haemost. 19 (7), 1800-1812 (2021).</li>
<li>Johnson, L., Lei, P., Waters, L., Padula, M. P., Marks, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+platelet+subpopulations+in+cryopreserved+platelet+components+using+multi-colour+imaging+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Identification of platelet subpopulations in cryopreserved platelet components using multi-colour imaging flow cytometry.</a> Sci Rep. 13 (1), 1221(2023).</li>
<li>Laspa, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemin-induced+platelet+activation+is+regulated+by+the+ACKR3+chemokine+surface+receptor+and+has+implications+for+passivation+of+vulnerable+atherosclerotic+plaques%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Hemin-induced platelet activation is regulated by the ACKR3 chemokine surface receptor and has implications for passivation of vulnerable atherosclerotic plaques.</a> FEBS J. 291 (24), 5420-5434 (2024).</li>
<li>Mueller, K. A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+Migration+Inhibitory+Factor+Promotes+Thromboinflammation+and+Predicts+Fast+Progression+of+Aortic+Stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Macrophage Migration Inhibitory Factor Promotes Thromboinflammation and Predicts Fast Progression of Aortic Stenosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 44 (9), 2118-2135 (2024).</li>
<li>Jourdi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+report+on+flow+cytometry+for+platelet+function+testing+in+thrombocytopenic+patients%3A+communication+from+the+SSC+of+the+ISTH%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Consensus report on flow cytometry for platelet function testing in thrombocytopenic patients: communication from the SSC of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 21 (10), 2941-2952 (2023).</li>
<li>Flores-Montero, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorochrome+choices+for+multi-color+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Meth%22%5BJournal%5D)">Fluorochrome choices for multi-color flow cytometry.</a> J Immunol Meth. 475, 112618(2019).</li>
<li>Clemetson, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+expression+of+CCR1%2C+CCR3%2C+CCR4%2C+and+CXCR4+chemokine+receptors+on+human+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Functional expression of CCR1, CCR3, CCR4, and CXCR4 chemokine receptors on human platelets.</a> Blood. 96 (13), 4046-4054 (2000).</li>
<li>Rohlfing, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ACKR3+regulates+platelet+activation+and+ischemia-reperfusion+tissue+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">ACKR3 regulates platelet activation and ischemia-reperfusion tissue injury.</a> Nat Commun. 13 (1), 1823(2022).</li>
<li>Rath, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+stromal+cell-derived+factor-1+receptors+CXCR4+and+CXCR7+on+circulating+platelets+of+patients+with+acute+coronary+syndrome+and+association+with+left+ventricular+functional+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Expression of stromal cell-derived factor-1 receptors CXCR4 and CXCR7 on circulating platelets of patients with acute coronary syndrome and association with left ventricular functional recovery.</a> Eur Heart J. 35 (6), 386-394 (2014).</li>
<li>Hashemzadeh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+review+of+the+ten+main+platelet+receptors+involved+in+platelet+activity+and+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Blood+Res%22%5BJournal%5D)">A comprehensive review of the ten main platelet receptors involved in platelet activity and cardiovascular disease.</a> Am J Blood Res. 13 (6), 168-188 (2023).</li>
<li>Moroi, M., Farndale, R. W., Jung, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation-induced+changes+in+platelet+surface+receptor+expression+and+the+contribution+of+the+large-platelet+subpopulation+to+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Pract+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Activation-induced changes in platelet surface receptor expression and the contribution of the large-platelet subpopulation to activation.</a> Res Pract Thromb Haemost. 4 (2), 285-297 (2020).</li>
<li>Busuttil-Crellin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+panel+design%2C+optimization%2C+and+performance+of+whole+blood+multi-color+flow+cytometry+of+platelet+surface+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">Guidelines for panel design, optimization, and performance of whole blood multi-color flow cytometry of platelet surface markers.</a> Platelets. 31 (7), 845-852 (2020).</li>
<li>Fink, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Subtilisin-Like+Protease+Furin+Regulates+Hemin-Dependent+Ectodomain+Shedding+of+Glycoprotein+VI%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The Subtilisin-Like Protease Furin Regulates Hemin-Dependent Ectodomain Shedding of Glycoprotein VI.</a> Thromb Haemost. 123 (7), 679-691 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x Buffer de encuadernación&nbsp; &nbsp;</td><td>Invitrogen, Carlsbad, California, USA</td><td>88-8103-74</td><td>Tampón</td></tr><tr><td>Difosfato de adenosina (ADP)</td><td>Probe & go Labordiagnostica GmbH Lemgo, Alemania&nbsp; &nbsp;</td><td>70212</td><td>Agonista plaquetario</td></tr><tr><td>Anexina V PE-Cianina7</td><td>Invitrogen, Carlsbad, California, EE.UU.</td><td>88-8103-74</td><td>colorante&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CD41 AF 700</td><td>BioLegend, San Diego, CA, USA</td><td>303728</td><td>anticuerpos&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CD41 Alexa Fluor 700</td><td>BioLegend, San Diego, CA, USA</td><td>303727</td><td>anticuerpos&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CD42b PerCP/Cianina5.5&nbsp;</td><td>BioLegend, San Diego, CA, USA</td><td>303918</td><td>anticuerpos&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CD61 BV605</td><td>BD Bioscience Franklin Lakes, NJ, EE. UU.</td><td>744382</td><td>anticuerpos&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CD62P PE</td><td>Beckman Coulter, Brea, California, EE. UU.</td><td>IM1759U</td><td>anticuerpo&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CD63 PE/Cy5&nbsp;</td><td>Abcam, Cambrigde, UK</td><td>ab 234251</td><td>anticuerpo&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CXCR4 BV650</td><td>BD Bioscience Franklin Lakes, NJ, EE. UU.</td><td>740599</td><td>anticuerpos&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CXCR7 BV421&nbsp;</td><td>BD Bioscience Franklin Lakes, NJ, EE. UU.&nbsp;</td><td>566234</td><td>anticuerpos&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-PAC-1 FITC</td><td>BD Bioscience Franklin Lakes, NJ, EE. UU.</td><td>340507</td><td>anticuerpos&nbsp;</td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina (BSA)</td><td>Applichem, Darmstadt, Alemania</td><td>A1391-Ácido</td><td></td></tr> <tr><td>cítrico</td><td>Carl Roth, Karlsruhe, Alemania</td><td>6490.1-CRP-XL</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>CambCol Laboratories, Ely, Reino Unido</td> Agonista <td>plaquetario CRP-XL</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>D-(+)-Glucosa</td><td>Sigma Aldrich Co., St. Louis, Missouri, EE. UU.</td><td>G7528-Dubecco</td><td></td></tr><tr><td>' s Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Sigma Aldrich Co, St. Louis, Missouri, USA</td><td>D8537-Hemin</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich Co., St. Louis, Missouri, USA</td><td>Agonista plaquetario</td> <td>H9039-10G</td>&nbsp;</tr><tr><td>HEPES</td><td>Carl Roth, Karlsruhe, Alemania</td><td>9105.3-Cloruro</td> <td>de</td></tr> <tr><td>potasio&nbsp;</td><td>Carl Roth, Karlsruhe, Alemania</td><td>6781.3-Cloruro</td> <td>de</td></tr> <tr><td>sodio&nbsp;</td><td>Carl Roth, Karlsruhe, Alemania</td><td>3957.1-Hidrogenocarbonato</td><td></td></tr> <tr><td>de sodio&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma Aldrich Co, St. Louis, Missouri, USA</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>401676-Trombina&nbsp;</td><td>Roche&nbsp;</td><td>10602400001</td><td>agonista plaquetario</td></tr><tr><td>citrato de trisodio-dihidrato&nbsp;</td><td>Applichem, Darmstadt, Alemania</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>1416551211-Zombie NIR</td><td>BioLegend, San Diego, CA, EE. UU</td><td>. colorante</td><td>reactivo a las aminas 423105&nbsp;</td></tr></tbody></table>

análisis de subpoblaciones de plaquetas mediante citometría de flujo multicolor

Analyzing Platelet Subpopulations by Multi-color Flow Cytometry

Hay dos opciones para analizar los datos brutos recopilados por un panel de citometría de flujo multicolor. Una opción es analizarlo manualmente con el software de análisis (Figura 3 y Figura 4). Por lo tanto, los datos sin procesar deben arrastrarse y soltarse en la ventana del software. En primer lugar, es necesario encontrar las células ajustando la escala SSC/FSC en el modo de visualización del diagrama de dispersión para mostrar la población de plaquetas co...

Análisis de subpoblaciones de plaquetas mediante citometría de flujo multicolor

Platelets, or thrombocytes, are small anucleated blood cells that play a crucial role in hemostasis and thrombosis. Defects in platelet functions can ...

analyzing-platelet-subpopulations-by-multi-color-flow-cytometry

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

En este informe, demuestran los pasos de tinción y análisis de un ensayo de fenotipo realiza en la sangre entera fresca para enumerar las principales poblaciones de leucocitos innatos y adaptativos. Hacemos hincapié en las consideraciones para llevar a cabo estos procedimientos en el contexto de un ensayo clínico multicéntrico.

La enumeración de las principales poblaciones de leucocitos de sangre periférica en ensayos clínicos multicéntricos utilizando un ensayo de sangre entera Fenotipado

Este trabajo describe un método basado en microscopía de fluorescencia para el estudio de la adhesión plaquetaria, la extensión y la secreción bajo flujo. Esta plataforma versátil permite la investigación de la función plaquetaria para la investigación mecánica sobre trombosis y hemostasia.

Imágenes de células vivas de desgranulación plaquetaria y secreción bajo flujo

Aquí, presentamos un protocolo de citometría de flujo para identificar CD4+ y CD8+ T las células, las células de T del γδ, células B, células NK y monocitos en sangre periférica mediante sólo dos fluorocromos en lugar de siete. Con este enfoque, se pueden grabar cinco marcadores adicionales en la mayoría los citómetros de flujo.

Discriminación de siete subconjuntos de células inmunes por dos fluorocromo citometría de flujo

Aquí, la sangre del ratón se recogió en presencia de un anticoagulante. Las plaquetas fueron purificadas por medio degradado de iohexol utilizando centrifugación de baja velocidad. Las plaquetas se activaron con trombina para investigar si eran viables. La calidad de las plaquetas purificadas fue analizada por citometría de flujo y microscopía.

Purificación de plaquetas de la sangre del ratón

Este protocolo describe en detalle todos los pasos implicados en la obtención de progenitores hematopoyéticos CD34+ derivados de leucofiltros y su diferenciación y maduración in vitro en megacariocitos portadores de proplatlet que son capaces de liberar plaquetas en el medio de cultivo. Este procedimiento es útil para el análisis en profundidad de los mecanismos celulares y moleculares que controlan la megacaripoyesis.

Los filtros de leucodepleción derivan de células CD34+ como fuente celular para estudiar la diferenciación de megacariocitos y la formación de plaquetas

Aquí se presenta una técnica basada en citometría de flujo que permite medir simultáneamente el número de divisiones celulares, el fenotipo celular superficial y el parentesco celular. Esas propiedades se pueden probar estadísticamente utilizando un marco basado en permutaciones.

Evaluación simultánea del parentesco, el número de división y el fenotipo mediante citometría de flujo para células madre y progenitoras hematopoyéticas

La formación de plaquetas procoagulantes se ha correlacionado con un mayor riesgo de trombosis. Aquí se presenta un protocolo preciso para aislar plaquetas lavadas de la sangre humana, destinado a cuantificar la exposición a la fosfatidilserina y la liberación de microvesículas, que son características distintivas de las plaquetas procoagulantes.

Caracterización de plaquetas procoagulantes mediante la medición de la exposición a fosfatidilserina y la liberación de microvesículas de plaquetas humanas purificadas

Este artículo describe el protocolo para cuantificar el porcentaje de plaquetas positivas para el factor tisular (TF) utilizando citometría de flujo sanguíneo total, evaluando la proteína: (1) intracelularmente en condiciones de reposo, y (2) en la superficie celular, tanto en reposo como en condiciones activadas. También se proporciona orientación para evaluar plaquetas TF-positivas en plasma rico en plaquetas.

Análisis de citometría de flujo de la expresión de factores tisulares en plaquetas humanas

El presente protocolo proporciona un conjunto completo de procedimientos necesarios para analizar las plaquetas procoagulantes, que exhiben características superpuestas de necrosis, apoptosis y activación plaquetaria.

Análisis exhaustivo de plaquetas procoagulantes que presentan características de necrosis, apoptosis y activación plaquetaria

Este artículo describe un método para estudiar el metabolismo celular en comunidades complejas de múltiples tipos de células, utilizando una combinación de rastreo de isótopos estables, clasificación de células para aislar tipos específicos de células y espectrometría de masas.

Un método para medir el metabolismo en muestras ordenadas subpoblaciones de Comunidades celulares complejas utilizando isótopos estables de Búsquedas

Aprende citometría de flujo multicolor para identificar subpoblaciones plaquetarias y analizar patrones de activación con diferentes agonistas. Este método avanza la comprensión de la función plaquetaria en trombosis.

Análisis de subpoblaciones de plaquetas mediante citometría de flujo multicolor

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