Name: Un método simple y eficiente para probar agentes inmunomoduladores para la generación de células dendríticas tolerogénicas a partir de monocitos CD14+ humanos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T14:50:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: Aprende a generar células dendríticas tolerogénicas a partir de monocitos CD14+ humanos mediante tratamientos inmunomoduladores. Este método valida la inducción de células T reguladoras para terapias autoinmunes y trasplantes.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>0.1-10 &micro; L Puntas de pipeta filtradas</td><td>VWR</td><td>76322-158</td><td>Cultivo celular general</td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga de 1,5 ml</td><td>VWR</td><td>77508-358</td><td>Cultivo celular general</td></tr><tr><td>Pipetas serológicas de 10 ml</td><td>VWR</td><td>414004-267</td><td>Cultivo celular general</td></tr><tr><td>100-1000 &micro; L Puntas de pipeta filtradas</td><td>VWR</td><td>76322-164</td><td>Cultivo celular general</td></tr><tr><td>Tubo cónico de 15 mL</td><td>VWR</td><td>77508-212</td><td>Cultivo celular general</td></tr><tr><td>20-200 &micro; Puntas de pipeta filtradas L</td><td>VWR</td><td>76322-160</td><td>Cultivo celular general</td></tr><tr><td>2-Mercaptoetanol</td><td>MP Cultivo de</td><td>células T</td><td>194834</td> biomédicas</tr><tr><td>Tubo cónico de 50 ml</td><td>VWR</td><td>21008-736</td><td>Cultivo celular general</td></tr><tr><td>Plato de 60 x 15 mm, Nunclon Delta</td><td>Thermo Fischer</td><td>150326</td> Cultivo <td>celular general</td></tr><tr><td>Placa inferior cónica (V) de 96 pocillos, superficie no tratada</td><td>Thermo Fischer</td><td>277143</td><td>General Cell Culture</td></tr><tr><td>Placa de fondo plano de 96 pocillos</td><td>Thermo Fischer</td><td>161093</td><td>General Cell Culture</td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 anticuerpo CD272 antihumano (BTLA)</td><td>Biolegend</td><td>344518</td><td>Flow Cytometry</td></tr><tr><td>Attune NxT (láser rojo/azul, 7 canales)</td><td>Thermo Fischer</td><td>A24863</td><td>Flow Cytometry</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Thermo Fischer</td><td>15260-037</td><td>General Cell Cultivo</td></tr>: <tr><td>anticuerpo monoclonal CD14 (61D3), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>12-0149-42</td>, <td>citometría de flujo</td></tr>, <tr><td>anticuerpo monoclonal CD1c (L161), PE-cianina7</td>, <td>Thermo Fischer</td><td>25-0015-42</td>, <td>citometría de flujo</td></tr>, <tr><td>anticuerpo monoclonal CD209 (DC-SIGN) (eB-h209), PerCP-cianina5.5</td>, <td>termo fischer</td><td>45-2099-42</td>, <td>citometría de flujo</td></tr><tr><td>, anticuerpo monoclonal CD25 (CD25-4E3), APC</td><td>Thermo Fischer</td><td>17-0257-42</td><td>Anticuerpo</td></tr><tr><td>monoclonal CD274 (PD-L1, B7-H1) de citometría de flujo (MIH1), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>12-5983-42</td><td>Anticuerpo</td></tr><tr><td>monoclonal CD4 de citometría de flujo (RPA-T4), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fischer</td><td>53-0049-42</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo monoclonal CD40 de citometría de flujo (5C3), APC</td><td>Thermo Fischer</td><td>17-0409-42</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo monoclonal CD40 de citometría de flujo (5C3), APC-eFluor 780</td><td>Thermo Fischer</td><td>47-0409-42</td><td>Citometría de flujo</td></tr><tr><td>Anticuerpo monoclonal CD69 (FN50), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>MA1-10276</td><td>Citometría de flujo</td></tr><tr><td>Anticuerpo monoclonal CD86 (BU63), FITC</td><td>Thermo Fischer</td><td>MHCD8601</td><td>Citometría de flujo</td></tr><tr><td>Anticuerpo monoclonal CD8a (RPA-T8), PE-Cianina7</td><td>Thermo Fischer</td><td>25-0088-42</td><td>Citometría</td></tr> <tr><td>de flujoFondo cónico (pocillo en V) Placa de 96 pocillos</td><td>Thermo Fischer</td><td>2605</td><td>Viales</td></tr> criogénicos de citometría de flujo<tr><td>, 2 ml</td> de dimetilsulfóxido de <td>cultivo de células T</td><td>Thermo Fischer</td><td>430488</td> T</tr><tr><td>(DMSO), grado de secuenciación</td><td>Thermo Fischer</td><td>20688</td><td>Cultivo celular general</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo Fischer</td><td>14200166</td><td>General</td></tr><tr><td>Cell Culture Kit de aislamiento de monocitos humanos EasySep</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>19359</td><td>Separación celular</td></tr><tr><td>Kit de aislamiento de células T humanas EasySep</td> Stem <td>Cell Technologies</td><td>17951</td><td>Separación celular</td></tr><tr><td>EasySep Magnet</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>18000</td><td>Separación celular</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Thermo Fischer</td><td>AIM9260G</td><td>General Cell Culture</td></tr><tr><td>Falcon Tubos de poliestireno de fondo redondo, 5 mL</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>38025</td><td>Separación celular</td></tr><tr><td>Inhibidor de unión al receptor Fc Anticuerpo policlonal</td><td>Thermo Fischer</td><td>14-9161-73</td><td>Citometría de flujo</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Thermo Fischer</td><td>A5670701</td><td>Cultivo celular general</td></tr><tr><td>Colorante de viabilidad fijable eFluor 780</td><td>Thermo Fischer</td><td>65-0865-18</td><td>Citometría de flujo</td></tr><tr><td>Foxp3 / Juego de tampones de tinción de factor de transcripción</td><td>Thermo Fischer</td><td>00-5523-00</td><td>Citometría de flujo</td></tr><tr><td>FOXP3 Anticuerpo monoclonal (PCH101), PE-cianina5.5</td><td>Thermo Fischer</td><td>35-4776-42</td><td>Citometría de flujo</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Thermo Fischer</td><td>14170-112</td><td>Cultivo celular general</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino inactivado por calor</td><td>Thermo Fischer</td><td>A5670801</td><td>Cultivo celular general</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fischer</td><td>15630106</td><td>célula moDC </td></tr><tr><td>Cultivo de anticuerpo monoclonal HLA-DR (L243), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fischer</td><td>A51009</td><td>Citometría de flujo</td></tr><tr><td>Activador de células T CD3/CD28/CD2 humanas</td><td>StemCell Technologies</td><td>10970</td><td>Cultivo de células T</td></tr><tr><td>Proteína recombinante GM-CSF humana</td><td>Thermo Fischer</td><td>300-03</td><td>moDC Cultivo celular</td></tr><tr><td>IL-10 humano Kit ELISA, alta sensibilidad</td><td>Thermo Fischer</td><td>BMS215-2HS</td><td>ELISA</td></tr><tr><td>IL-4 humana, proteína recombinante libre de animales</td><td>Thermo Fischer</td><td>AF-200-04</td><td>moDC Cultivo celular</td></tr><tr><td>PBMC humano (recién aislado)</td><td>UPenn HIC</td><td>N</td><td>/A</td></tr><tr><td>Cells Kit ELISA TNF alfa humano</td><td>Thermo Fischer</td><td>BMS223-4</td><td>ELISA</td></tr><tr><td>Microscopio óptico (DMi1)</td><td>Lucia</td><td>391240</td> Lipopolisacárido <td>de cultivo celular general</td></tr><tr><td>(LPS)</td><td>Invivogen</td><td>tlrl-eblps</td><td>moDC Cell Culture</td></tr><tr><td>LIVE/DEAD Kit de tinción de células muertas de infrarrojo cercano fijable</td><td>Thermo Fischer</td><td>L34975</td><td></td></tr><tr><td>Solución de aminoácidos no esenciales MEM de citometría de flujo (100x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>11140050</td><td>T Cell Culture</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina (100x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>15140122</td> Controlador <td>de pipetas de cultivo celular general</td></tr><tr><td></td><td>VWR</td><td>77575-370</td><td>Cultivo celular general</td></tr><tr><td>Rapamicina, 98+%</td><td>Thermo Fischer</td><td>J62473. MF</td><td>moDC Cell Culture</td></tr><tr><td>RPMI 1640 con Glutamax</td><td>Thermo Fischer</td><td>61870-036</td> Tampón <td>de separación de cultivos celulares generales</td></tr><tr><td></td><td>Stem Cell Technologies</td><td>20144</td><td>Cóctel</td></tr> de <tr><td>estimulación de células T de separación celular (500x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>00-4970-93</td><td>T Cell Culture</td></tr><tr><td>UltraComp eBead Plus Compensation Beads Thermo</td><td>Fischer</td><td>01-3333-41</td><td>Flow Set</td></tr><tr>de<td>pipetas variables</td> de citometría <td>Fischer Scientific</td><td>05-403-152</td><td>Cultivo celular general</td></tr></tbody></table>

un método simple y eficiente para probar agentes inmunomoduladores para la generación de células dendríticas tolerogénicas a partir de monocitos cd14+ humanos

A Simple and Efficient Method for Testing Immunomodulatory Agents for Generation of Tolerogenic Dendritic Cells from Human CD14+ Monocytes

Hemos descrito un protocolo para PBMCs humanas, aislar tanto las células T CD3+ como los monocitos CD14+ utilizando kits de separación magnética disponibles en el mercado, diferenciar los monocitos en CD14-, HLA-DR+, CD141+, CD1c+ moDCs utilizando GM-CSF e IL-4, tratarlos durante 24 h y cocultivar con células T autólogas con estimulación anti-CD3/CD28 durante 72 h. En la Figura 1 se muestra un esquema experimental.
<p clas...

Un método simple y eficiente para probar agentes inmunomoduladores para la generación de células dendríticas tolerogénicas a partir de monocitos CD14+ humanos

Tolerogenic dendritic cells (tolDCs) are a subset of dendritic cells (DCs) that are known to influence na&#239;ve T cells toward a regulatory T cell ...

a-simple-efficient-method-for-testing-immunomodulatory-agents-for

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

La presentación de antígenos en los órganos linfoides secundarios por las células dendríticas es fundamental para el inicio de la célula T mediada por la respuesta inmune adaptativa. Aquí se demuestra la cultura de la médula ósea procedentes de células dendríticas murinas, la activación, y el etiquetado de dos fotones de imágenes.

Generación de médula ósea procedentes de células murinas dendríticas para su uso en dos fotones de imágenes

Este video muestra la generación de células dendríticas inmaduras, maduras y tolerogénicas, o CD, a partir de monocitos humanos. La incubación de monocitos con factores de crecimiento y citocinas conduce a la producción de CD inmaduras. En respuesta a las moléculas inmunorreguladoras, las CD inmaduras se diferencian en CDs tolerogénicas y maduras.

Generación de células dendríticas inmaduras, maduras y tolerogénicas a partir de monocitos

Este video muestra un método de conversión de células dendríticas (CD) en CD tolerogénicas (TolDC) utilizando un agente farmacológico inmunomodulador. Esta conversión se confirma mediante la evaluación de la función de TolDC a través de su efecto inmunosupresor sobre las células T CD4+.

Efecto de un agente farmacológico inmunomodulador en la interacción entre células dendríticas y linfocitos T CD4+

Las células dendríticas inmaduras pueden diferenciarse selectivamente en células dendríticas tolerogénicas o maduras para regular el equilibrio entre inmunidad y tolerancia. Este trabajo presenta un medio para generar a partir de células dendríticas inmaduras derivadas de monocitos (moDCs), in vitro tolerogénicas y moDCs maduras que difieren en fenotipos metabólicos.

Generación de inmaduras, maduras y tolerogénico células dendríticas con diferentes fenotipos metabólico

Este estudio compara dos métodos diferentes de aislamiento de monocitos humanos para obtener células dendríticas (CD) in vitro. Los monocitos se seleccionan por adherencia o se enriquecen negativamente por separación magnética. Se comparará el rendimiento y la viabilidad de los monocitos junto con la viabilidad, la proliferación y la expresión de marcadores de superficie CD11c/CD14 entre ambos métodos.

Caracterización de las células dendríticas derivadas de monocitos humanos mediante imágenes de Citometría de Flujo: una comparación entre dos protocolos de aislamiento de monocitos

Aquí, demostramos cómo se aíslan los monocitos mediante la separación magnética de perlas de las células mononucleares de sangre periférica después de la centrifugación en gradiente de densidad de la sangre humana anticoagulada. Después de la incubación durante 5 días, los monocitos humanos se diferencian en células dendríticas inmaduras y están listos para procedimientos experimentales en un entorno no clínico.

Generación de células dendríticas derivadas de monocitos humanos de sangre entera

Aquí, presentamos un protocolo para desarrollar y caracterizar células dendríticas tolerogénicas (TolDCs) y evaluar su utilidad de la inmunoterapia.

Desarrollo y caracterización funcional de células dendríticas tolerogénicas murino

El dispositivo o placa de transimmunización (TI) y los protocolos relacionados se han desarrollado para replicar las características clave de la fotoquimioterapia extracorpórea (ECP), en un entorno experimental, lo que permite la producción de células (DCs) para la inmunoterapia oncológica.

Nuevo protocolo para la generación de células dendríticas inmunogénicas fisiológicas

Aquí presentamos un protocolo para el aumento in vivo de la inducción de células T reguladoras intestinales. En este protocolo, las células dendríticas están diseñadas para producir localmente altas concentraciones de la vitamina D activa (1,25-dihidroxivitamina D o 1,25[OH]2D) y la vitamina A activa (ácido retinoico o RA) de novo.

En Vivo Aumento de la Inducción de Células T Regulatorias Gut-Homing

La metodología describe la generación de células dendríticas derivadas de monocitos bovinos (MoDC) y su aplicación para la evaluación in vitro de candidatos antigénicos durante el desarrollo de posibles vacunas veterinarias en bovinos.

Determinación de la inmunogenicidad de la vacuna utilizando células dendríticas derivadas de monocitos bovinos

Se presenta un protocolo único y completo para generar células dendríticas derivadas de monocitos humanos desialiladas (mo-DC) a partir de células mononucleares aisladas de sangre periférica (PBMC) utilizando un tratamiento con siaridasa. Además, se describen métodos para evaluar la caracterización fenotípica y funcional de las mo-DC y evaluar cómo el tratamiento con sialidasa mejora el nivel de maduración de las mo-DC.

Generación de células dendríticas derivadas de monocitos con diferentes fenotipos sialilados

Aprende a generar células dendríticas tolerogénicas a partir de monocitos CD14+ humanos mediante tratamientos inmunomoduladores. Este método valida la inducción de células T reguladoras para terapias autoinmunes y trasplantes.

Un método simple y eficiente para probar agentes inmunomoduladores para la generación de células dendríticas tolerogénicas a partir de monocitos CD14+ humanos (Video) | JoVE Journal

Un método simple y eficiente para probar agentes inmunomoduladores para la generación de células dendríticas tolerogénicas a partir de monocitos CD14⁺ humanos

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