Name: Imágenes de alta resolución de C. elegans en todas las etapas larvales (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: Aprende a realizar imágenes de alta resolución de C. elegans en todas las etapas larvales mediante microfluidos. Este método permite observar procesos dinámicos de desarrollo in vivo manteniendo la viabilidad del organismo.

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<ol><li>Sulston, J. E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-embryonic+cell+lineages+of+the+nematode%2C+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Post-embryonic cell lineages of the nematode, Caenorhabditis elegans.</a> Dev Biol. 56 (1), 110-156 (1977).</li>
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<li>Krajniak, J., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+high-resolution+imaging+and+culture+of+C.+elegans+in+chip-gel+hybrid+microfluidic+device+for+developmental+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Long-term high-resolution imaging and culture of C. elegans in chip-gel hybrid microfluidic device for developmental studies.</a> Lab Chip. 10 (14), 1862-1868 (2010).</li>
<li>Samara, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+in+vivo+femtosecond+laser+neurosurgery+screen+reveals+small-molecule+enhancer+of+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Large-scale in vivo femtosecond laser neurosurgery screen reveals small-molecule enhancer of regeneration.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (43), 18342-18347 (2010).</li>
<li>Stirman, J. N., Brauner, M., Gottschalk, A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+study+of+synaptic+transmission+at+the+neuromuscular+junction+enabled+by+optogenetics+and+microfluidics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput study of synaptic transmission at the neuromuscular junction enabled by optogenetics and microfluidics.</a> J Neurosci Methods. 191 (1), 90-93 (2010).</li>
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<li>Spiri, S., Berger, S., Mereu, L., DeMello, A., Hajnal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+EGFR+signaling+in+the+anchor+cell+ensures+precise+inter-organ+connection+during+Caenorhabditis+elegans+vulval+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Reciprocal EGFR signaling in the anchor cell ensures precise inter-organ connection during Caenorhabditis elegans vulval morphogenesis.</a> Development. 149 (1), dev199900(2022).</li>
<li>Gritti, N., Kienle, S., Filina, O., Van Zon, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+time-lapse+microscopy+of+C.+elegans+post-embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Long-term time-lapse microscopy of C. elegans post-embryonic development.</a> Nat Commun. 7 (1), 12500(2016).</li>
<li>Keil, W., Kutscher, L. M., Shaham, S., Siggia, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+high-resolution+imaging+of+developing+C.+elegans+larvae+with+microfluidics%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Long-term high-resolution imaging of developing C. elegans larvae with microfluidics.</a> Dev Cell. 40 (2), 202-214 (2017).</li>
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<li>Agarwal, P., Berger, S., Shemesh, T., Zaidel-Bar, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+nuclear+positioning+and+actomyosin+contractility+maintain+leader+cell+integrity+during+gonadogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Active nuclear positioning and actomyosin contractility maintain leader cell integrity during gonadogenesis.</a> Curr Biol. 34 (11), 2373-2386 (2024).</li>
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<li>Mok, D. Z., Sternberg, P. W., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphologically+defined+sub-stages+of+C.+elegans+vulval+development+in+the+fourth+larval+stage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Morphologically defined sub-stages of C. elegans vulval development in the fourth larval stage.</a> BMC Dev Biol. 15, 1-8 (2015).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Válvula solenoide 3/2&nbsp;</td><td>Distrelec</td><td>154-22-898 y 154-22-899</td><td>Alternativa a la anterior. Válvula solenoide que conecta el regulador de presión a la válvula en chip.</td></tr><tr><td>Arduino</td><td>Distrelec</td><td>301-01-956</td><td>Microcontrolador opcional según el controlador y la interfaz seleccionados.</td></tr><tr><td>Bacto-Triptona</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>211705</td><td>para la producción de caldo L.</td></tr><tr><td>Termo de levadura Bacto-Fisher</td><td>Scientific</td><td>212750</td><td>para la producción de caldo L.</td></tr><tr><td>Aguja roma 23G</td><td>Gonano Dosiertechnik</td><td>GGA723050&nbsp;</td><td>Aguja roma que conecta el tubo de 1/16" a una jeringa.</td></tr><tr><td>Aguja roma 30G</td><td>Gonano Dosiertechnik</td><td>IG-TE730050</td><td>Aguja roma que conecta el tubo de 1/32" a una jeringa.</td></tr><tr><td>C. elegans Constructo 1</td><td>NA</td><td>NA</td><td>AH5786 LGI: hmr-1(cp21[hmr-1::gfp + LoxP]) Marston, D.J. et al. MRCK-1 impulsa la constricción apical en C. elegans al vincular el patrón de desarrollo con la generación de fuerza. Curr. Biol. 26 (16), 2079-2089. 2016</td></tr><tr><td>.C. elegans Constructo 2</td><td>NA</td><td>NA</td><td>AH1187 LGII: arIs92[egl-17::cfp] Yoo, A.S., Bais, C., Greenwald, I. Diafonía entre las vías EGFR y LIN-12/Notch en el desarrollo vulvar de C. elegans. Ciencia. 303 (5658), 663-666. 2004.</td></tr><tr><td>C. elegans Construct 3</td><td>NA</td><td>NA</td><td>AH5786 LGV: qyIs50[Pcdh-3>mCherry::moeABD, unc-119(+)] Ziel, J.W., Hagedorn, E.J., Audhya, A., Sherwood, D.R. UNC-6 (netrin) orienta la membrana invasiva de la célula de anclaje en C. elegans. Nat. Cell Biol., 11 (2), 183-189. 2009.</td></tr><tr><td>C. elegans Construct 4</td><td>NA</td><td>NA</td><td>ML2615 LGX: dlg-1(mc103[dlg-1::gfp]) Vuong-Brender, T.T.K., Suman, S.K., Labouesse, M. La ECM apical preserva la integridad embrionaria y distribuye el estrés mecánico durante la morfogénesis. Desarrollo. 144 (23), 4336-4349. 2017.Cable</td></tr> <tr><td></td><td>Distrelec</td><td>143-46-644</td><td>Necesario si se selecciona el solenoide de distrelec. Cable que conecta el solenoide al MOSFET.</td></tr><tr><td>Clorotrimetilsilano&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>386529-25ML</td><td>Silane para pasivación de obleas.</td></tr><tr><td>Colesterol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C8667</td><td>Para Producción S-Basal.</td></tr><tr><td>Flyback Diode</td><td>Distrelec</td><td>110-52-628</td><td>Diodo flyback que protege el microcontrolador.</td></tr><tr><td>Pasador de acero hueco</td><td>Gonano Dosiertechnik</td><td>GGA7R23050&nbsp;</td><td>Pasador de acero hueco 23G que conecta el tubo de 1/16" al dispositivo.</td></tr><tr><td>L Caldo</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Preparado en casa siguiendo la receta estándar. 10 g de bactotriptona, 5 g de bacto-levadura, 5 g de NaCl, H2O a 1 litro, pH a 7,0 usando 1 M NaOH</td></tr><tr><td>Dispositivo de imagen a largo plazo L1</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Dispositivo de imagen a largo plazo para larvas L1 a L2 tempranas/medias. Hecho en casa, disponible bajo pedido. También disponible como variante de intercambio de medios.</td></tr><tr><td>Dispositivo de imagen a largo plazo L1-4</td><td>NA</td><td>NA Dispositivo</td><td>de imagen a largo plazo para larvas de L1 media a L4 media. Hecho en casa, disponible bajo pedido. También disponible como variante de intercambio de medios.</td></tr><tr><td>Dispositivo de imágenes a largo plazo L2-A</td><td>NA</td><td>NA Dispositivo</td> de <td>imágenes a largo plazo para la mitad de L2 a la edad adulta (eversión). Hecho en casa, disponible bajo pedido. También disponible como variante de intercambio de medios.</td></tr><tr><td>Dispositivo de imágenes a largo plazo L3-A</td><td>NA</td><td>NA Dispositivo</td> de <td>imágenes a largo plazo para la mitad de L3 hasta la edad adulta (eversión). Hecho en casa, disponible bajo pedido. También disponible como variante de intercambio de medios.</td></tr><tr><td>Dispositivo de imágenes a largo plazo L4-A</td><td>NA</td><td>NA Dispositivo</td><td>de imágenes a largo plazo para la mitad de L4 a la edad adulta (eversión). Hecho en casa, disponible bajo pedido. También disponible como variante de intercambio de medios.</td></tr><tr><td>Tampón M9</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Preparado en casa siguiendo la receta estándar.</td></tr><tr><td>MOSFET</td><td>Distrelec</td><td>303-41-391</td><td>Transistor de efecto de campo de semiconductor de óxido metálico, utilizado para conmutar los 24 V CC necesarios para el solenoide.</td></tr><tr><td>Platos NGM</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Preparados en casa siguiendo la receta estándar.</td></tr><tr><td>Adaptador de 11776048 de Nylon Luer-Fitting</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td>desde tubería OD de 6mm hasta aguja roma de 23G.</td></tr><tr><td>Optiprep</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D1556</td><td>Líquido de coincidencia de densidad.</td></tr><tr><td>PDMS</td><td>Ameba</td><td>Elastosil RT601A/B</td><td>PDMS kit de elastómero.</td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2443</td><td>Surfactante no iónico.</td></tr><tr><td>Dihidrogenofosfato de potasio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1.37039</td><td>Para Producción S-Basal.</td></tr><tr><td>Hidrogenofosfato de potasio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1.05099</td><td>Para&nbsp; Producción S-Basal.</td></tr><tr><td>Fuente de alimentación 24VDC</td><td>Distrelec</td><td>301-63-304</td><td>Fuente de alimentación de 24VDC. Seleccione una fuente de alimentación adecuada para el solenoide seleccionado.</td></tr><tr><td>Regulador de presión de precisión</td><td>Distrelec</td><td>154-23-578</td><td>Alterna a arriba. Regulador de presión.</td></tr><tr><td>Manómetro G1/8</td><td>Distrelec</td><td>154-23-643</td><td>El manómetro se acopla al regulador de presión.</td></tr><tr><td>Tubo de PU OD 6mm</td><td>Distrelec</td><td>154-23-866</td><td>Tubo que conecta la fuente de presión y el regulador, así como el regulador y la válvula solenoide.</td></tr><tr><td>Racor a presión G1/8 a 6mm</td><td>Distrelec</td><td>301-69-330</td><td>Alterna a lo anterior. 2x Racor a presión se acopla al regulador de presión y se conecta al tubo de 6mm.</td></tr><tr><td>Racor a presión M5 a 6 mm</td><td>Distrelec</td><td>301-69-459</td><td>2x El racor a presión se acopla al solenoide y al tubo de 6 mm.</td></tr><tr><td>Tampón S-Basal</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Preparado en casa siguiendo la receta estándar. 5,85 g de NaCl, 1 g de K2HPO4, 6 g de KH2PO4, 1 ml de colesterol (5 mg/ml en etanol), H2O por 1 litro. Esterilizar en autoclave.</td></tr><tr><td>Cloruro de sodio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9625</td><td>para la producción de caldo L y S-Basal.</td></tr><tr><td>Hidróxido de sodio (5M)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>567530</td><td>Hidróxido de sodio utilizado para blanquear C. elegans (preparar solución a una concentración de 5M)</td></tr><tr><td>Hipoclorito de sodio (5%)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1.05614</td><td>Hipoclorito de sodio utilizado para blanquear C. elegans (preparar la solución a una concentración del 5%)</td></tr><tr><td>Colador 10 &micro; m</td><td>pluriSelect</td><td>43-10010-40</td><td>Alternativa para la preparación de alimentos bacterianos, especialmente si se utilizan dispositivos más pequeños.</td></tr><tr><td>Colador 5 &micro; m</td><td>pluriSelect</td><td>43-10005-40</td><td>Colador utilizado para filtrar larvas L1 después de la inanición nocturna y bacterias después de la preparación completa de alimentos.</td></tr><tr><td>SU-8</td><td>Gersteltec</td><td>GM1050</td><td>SU-8 para altura de 1-10 &micro;m.</td></tr><tr><td>SU-8</td><td>Gersteltec</td><td>GM1060</td><td>SU-8 para altura de 5-30 &micro;m.</td></tr><tr><td>SU-9</td><td>Gersteltec</td><td>GM1070</td><td>SU-8 para altura de 15-200 &micro;m.</td></tr><tr><td>Jeringa de 1 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>11338763</td><td>jeringa de 1 ml. Si usa un tipo diferente, asegúrese de que el cuerpo de la jeringa y el émbolo estén rígidos, de modo que la bomba de jeringa no los deforme.</td></tr><tr><td>Bomba de jeringa</td><td>WPI</td><td>Al1000-220 Bomba de</td><td>jeringa (https://www.wpiinc.com/var-2300-aladdin-single-syringe-pump.html).</td></tr><tr><td>Tubo de 15 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-809-220</td><td>Tubo utilizado para blanqueo de lombrices y preparación de bacterias.</td></tr><tr><td>Tubo de 2 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1186931</td><td>Tubo utilizado para la preparación de lombrices y bacterias.</td></tr><tr><td>Tubo de 50 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-465-232</td><td>Tubo utilizado para la preparación y el crecimiento de bacterias.</td></tr><tr><td>Pinza SMD</td><td>Br&uuml; tsch R&uuml; huevo Werkzeuge</td><td>448980</td><td>Pinzas utilizadas para enchufar el tubo de 1/32" en el dispositivo.</td></tr><tr><td>Tubo Tygon de 1/16"</td><td>Fisher Scientific</td><td>642002</td><td>Tubo flexible de 1/16" de diámetro exterior que conecta la mayoría de los componentes al dispositivo.</td></tr><tr><td>Tubo Tygon 1/32"</td><td>Fisher Scientific</td><td>641900</td><td>Tubo flexible de 1/32" OD que conecta el suministro de bacterias al dispositivo.</td></tr><tr><td>UV KUB-3</td><td>Kloe</td><td>NA</td><td>Alineador de máscara y sistema de exposición UV.</td></tr><tr><td>Oblea</td><td>Siegert Wafer</td><td>4P0/>1/525&plusmn; 25/SSP/TTV< 10</td><td>Oblea de silicio.</td></tr><tr><td>Contenedor de residuos</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Preparado en casa con un tubo de 2 ml o un vial criogénico y pasadores de acero huecos.</td></tr></tbody></table>

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Time-lapse microscopía de embriogénesis temprana en Caenorhabditis elegans

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Simples dispositivos de microfluidos para<em&gt; In vivo</em&gt; Imágenes de<em&gt; C. elegans</em&gt;,<em&gt; Drosophila</em&gt; Y pez cebra

Este protocolo describe cómo reproducir la división de células dentro de un tejido en Caenorhabditis elegans embriones. Mientras que varios protocolos describen cómo la división celular imagen en el embrión temprano, este protocolo se describe cómo la imagen de la división celular dentro de un tejido en desarrollo durante la embriogénesis tardía mediados.

Visualizar Neuroblast Citocinesis Durante<em&gt; C. elegans</em&gt; Embriogénesis

La imagen del comportamiento y la actividad neuronal a largas escalas de tiempo sin inmovilización del animal es un requisito previo para comprender el comportamiento. Las imágenes de cámaras microfluídicas de agarosa (AMI) se pueden utilizar para obtener imágenes de la actividad y el comportamiento neuronal de todas las etapas de la vida de Caenorhabditis elegans.

Microcámaras de agarosa para Imagen de calcio a largo plazo de<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

La transparente C. elegans intestino puede servir como una"en vivo cámara de tejido" para el estudio de apicobasal membrana y lumen biogénesis a nivel unicelular y subcelular durante tubulogenesis multicelulares. Este protocolo describe cómo combinar etiquetas estándar, genética/pérdida de función RNAi y enfoques microscópicos para diseccionar estos procesos a nivel molecular.

El intestino C. elegans como modelo una morfogénesis Lumen intercelular y En Vivo biogénesis de la membrana polarizada a nivel unicelular: etiquetado de anticuerpos, ARNi pérdida-de-función análisis y proyección de imagen de

Aquí, presentamos un enfoque combinatorio usando microscopía de alta resolución, herramientas computacionales y etiquetado de una sola célula en los embriones vivos de C. elegans para entender la dinámica de una sola célula durante el neurodesarrollo.

Microscopía de lámina de luz isotrópica y análisis de linaje celular automatizado para catalogar Caenorhabditis elegans embriogénesis con resolución subcelular

Este trabajo describe un protocolo de semi-alto rendimiento que permite imágenes simultáneas de lapso de tiempo 3D de embriogénesis en embriones de 80-100 C. elegans en una sola carrera nocturna. Además, se incluyen herramientas de visualización y procesamiento de imágenes para agilizar el análisis de datos. La combinación de estos métodos con cepas de reportero personalizadas permite un seguimiento detallado de la embriogénesis.

Un método de imágenes de semi-alto rendimiento y un kit de herramientas de visualización de datos para analizar el desarrollo embrionario de C. elegans

El protocolo describe un diseño simple de chip microfluídico y una metodología de microfabricación utilizada para cultivar C. elegans en presencia de un suministro continuo de alimentos durante hasta 36 h. El dispositivo de crecimiento e imágenes también permite obtener imágenes intermitentes de alta resolución a largo plazo de procesos celulares y subcelulares durante el desarrollo durante varios días.

Un chip microfluídico simple para el crecimiento a largo plazo y la obtención de imágenes de Caenorhabditis elegans

La microscopía de superresolución puede proporcionar una visión detallada de la organización de los componentes dentro del complejo sinaptonémico en la meiosis. Aquí, demostramos un protocolo para resolver proteínas individuales del complejo sinaptonémico Caenorhabditis elegans .

Microscopía de superresolución del complejo sinaptonémico dentro de la línea germinal Caenorhabditis elegans

Aprende a realizar imágenes de alta resolución de C. elegans en todas las etapas larvales mediante microfluidos. Este método permite observar procesos dinámicos de desarrollo in vivo manteniendo la viabilidad del organismo.

Imágenes de alta resolución de C. elegans en todas las etapas larvales

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