Name: Modelado de la infección persistente por Pseudomonas aeruginosa en larvas de pez cebra heridas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T13:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: Aprende a modelar infecciones persistentes por Pseudomonas aeruginosa en larvas de pez cebra heridas. Este método in vivo reproduce la tolerancia antibiótica y facilita el cribado de compuestos terapéuticos.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Todos los experimentos con pez cebra descritos en el presente estudio se llevaron a cabo en la Universidad de Montpellier siguiendo los principios de las 3R -Reemplazo, Reducción y Refinamiento- de acuerdo con las directrices de la Unión Europea para el manejo de animales de laboratorio y fueron aprobados por la Dirección Sanitaria y Veterinaria del Hérault y el Comité d'Ethique pour l'utilisation d'animaux à des fins scientifiques bajo la referencia CEEA-LR-B4-172-37. Todos los experimentos de infección se llevaron a cabo en embriones hasta 5 días después de la fertilización. La cría de pez cebra adulto (Danio rerio) a partir de los peces AB o Golden Lines se adhirió a las directrices internacionales especificadas por la Directiva de Protección Animal de la UE 2010/63/UE. Instalación de pez cebra de la Universidad de Montpellier con condiciones estándar establecidas como un ciclo de luz: oscuridad de 12 h:12 h, tanque de policarbonato de 3,5 L (máximo 22 peces por tanque) conectado a un sistema de recirculación con 4% de salinidad/conductividad de 400 μS y temperatura del agua de 28 °C. Los peces fueron alimentados 2 veces al día con comida para peces.
1. Preparación de soluciones
<ol>
	<li>Prepare una solución de trabajo 1x para agua de peces con o sin azul de metileno para el crecimiento de embriones de pez cebra (ver Tabla 1).</li>
	<li>Prepare 20 veces el caldo (0,4%) y 1 solución anestésica de Tricaine que funcione, como se describe en la Tabla 1. Para evitar la congelación y descongelación repetidas de la solución madre, prepare 10 ml de alícuotas de 20x Tricaine y almacene a -20 °C.</li>
	<li>Prepare una solución de Triton al 2% diluida en 1x solución salina tamponada con fosfato (PBS; Tabla 1).</li>
</ol>
2. Preparación de inóculo de  P. aeruginosa fluorescente que expresa GFP constitutivamente
NOTA: Todos los trabajos con P. aeruginosa se realizan con precauciones BSL-2 en una cabina de bioseguridad. Las cepas de P. aeruginosa deben modificarse genéticamente para que expresen constitutivamente un indicador fluorescente, como la GFP (como se usa aquí y se describe en13). Se recomienda encarecidamente el uso de cepas con un indicador fluorescente codificado cromosómicamente para evitar la pérdida de plásmido en el caso de un indicador fluorescente codificado por plásmido.
<ol>
	<li>A los 2 días antes de la infección, se debe extraer a -80 °C una reserva de P. aeruginosa genéticamente modificada que expresa GFP en placas de agar LB (Tabla 1) e incubar durante la noche a 37 °C.</li>
	<li>Comprobar la fluorescencia de las colonias utilizando un microscopio fluorescente (Aumento 6x) para inocular una colonia de GFP+P. aeruginosa en 1 mL de caldo LB (Tabla 1) y crecer durante la noche a 37 °C con agitación (180 rpm).</li>
	<li>El día de la infección, diluir el cultivo nocturno de P. aeruginosa a 1:20 en 5 mL de caldo LB fresco. Cultive las bacterias a 37 °C con agitación (180 rpm) hasta que el cultivo alcance un diámetro exterior de600 = 0,8. Esto debería tomar aproximadamente 2-3 h.</li>
	<li>Centrifugar el cultivo bacteriano durante 10 min a temperatura ambiente (RT) a 3584 x g. Retire el sobrenadante y vuelva a suspender el pellet en 4 mL de agua de pescado sin azul de metileno.</li>
	<li>Adaptar el volumen de cultivo con agua de peces para tener 7 x 107 a 1 x 108 UFC/mL. Esto corresponde a un DE600 de aproximadamente 0,15 (a adaptar para cada cepa).</li>
	<li>Para cuantificar el inóculo, se realiza una dilución en serie de la suspensión bacteriana, se colocan 20 μL de la dilución 10-4 en una placa de agar LB y se incuba durante la noche a 37 °C.</li>
	<li>Cuente las colonias de GFP+ bajo un microscopio fluorescente para determinar las UFC del inóculo.</li>
</ol>
3. Recolección y preparación de embriones de pez cebra
<ol>
	<li>A los 3 días antes del experimento de inmersión bacteriana, configure parejas de cría de pez cebra. Coloque un macho y una hembra reproductores en un tanque de cruzamiento.</li>
	<li>A la mañana siguiente, recoja los huevos después de la fertilización con un colador de malla fina. Coloque los huevos recolectados en una placa de Petri que contenga agua de pescado con azul de metileno.</li>
	<li>Para evitar la contaminación, agregue 1 gota de lejía a la placa de Petri. Después de 5 minutos, cambie el agua de pescado con azul de metileno para eliminar la lejía.</li>
	<li>Deseche los huevos con un desarrollo embrionario anormal (los óvulos no fertilizados son similares a una etapa de óvulo de 1 célula) o muertos (apariencia blanca).</li>
	<li>En la mañana de la infección (a 2 dpf), descorionar los embriones con dos pinzas muy finas bajo el microscopio estereoscópico (aumento 11x). Desgarrar el corion con pinzas sin pellizcar el embrión para liberarlo.</li>
	<li>Coloque los embriones decorionados en una placa de Petri que contenga pescado con azul de metileno. Incubar las placas a 28 °C hasta la infección.</li>
</ol>
4. Lesión embrionaria
<ol>
	<li>Anestesiar embriones de pez cebra en agua de pescado sin azul de metileno, que contiene 0,02% de tricaína, aproximadamente 5 min antes de la lesión en una placa de cultivo celular (35 mm x 10 mm). Los embriones ya no se mueven y no responden a los estímulos.</li>
	<li>Coloque agujas de 25G en la parte superior de dos palillos para facilitar el manejo de las agujas.</li>
	<li>Bajo un microscopio estereoscópico, eliminar embriones con desarrollo anormal o muertos. Con un movimiento circular del plato, reúna todos los embriones en el centro.</li>
	<li>Aísla los embriones uno a uno utilizando dos agujas en posición vertical (cabeza abajo - cola arriba) y coloca la aguja izquierda en la cola para mantenerla recta. Corta la aleta en el borde de la notocorda con la aguja derecha. Haz el corte de una sola vez. No exceda los 10 minutos entre el corte y la inmersión en la solución bacteriana.</li>
</ol>
5. Infección de embriones heridos
<ol>
	<li>Bajo la cabina de seguridad biológica tipo II, vórtice y agregue la solución de P. aeruginosa a aproximadamente 1 x 107 UFC/mL a una placa de 6 pocillos.</li>
	<li>Recoja los embriones lesionados con una pipeta de vidrio Pasteur desechable y añádalos a la solución bacteriana debajo del puesto de seguridad microbiológica. Incubar la placa a 28 °C durante 1,5 h. NOTA: Si se necesita un gran número de larvas infectadas, haga grupos de unas 50 larvas, haga la herida, sumérjalas y repita para el siguiente grupo.</li>
	<li>Después de la infección, lavar los embriones bajo el puesto de seguridad microbiológica como se describe a continuación.<ol>
		<li>Transfiera los embriones con una pipeta de vidrio para un lavado a 10 mL de agua de pescado sin azul de metileno, agregando la menor cantidad de líquido posible, durante 30 min a temperatura ambiente.</li>
		<li>Transferir los embriones infectados de nuevo con una pipeta de vidrio para un segundo lavado a 4 mL de agua de pescado sin azul de metileno durante unos minutos.</li>
		<li>Transfiera 24 embriones infectados individualmente a una placa de pocillos múltiples con 1 mL de agua de pescado sin azul de metileno.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Coloque las placas en una caja de plástico en la incubadora a 28 °C. Humedece la caja (con toallas de papel húmedas, por ejemplo) para limitar la evaporación.</li>
</ol>
6. Supervivencia de los embriones infectados
<ol>
	<li>Para los estudios de supervivencia embrionaria, se comprueba la viabilidad bajo un microscopio estereoscópico a las 18 h, 24 h y 48 h postinfección (hpi). Un embrión se considera muerto cuando el corazón y la circulación sanguínea se detienen.</li>
	<li>Representar las tasas de mortalidad/supervivencia utilizando representaciones gráficas de la escalera de Kaplan-Meier (GraphPad Prism 8.3.0) y analizar los datos con un rango logarítmico u otras pruebas estadísticas apropiadas.</li>
</ol>
7. Recuento de la carga bacteriana en embriones infectados (Figura 1)
<ol>
	<li>Realice la determinación de UFC de embriones infectados en cuatro puntos de tiempo diferentes: 1,5 hpi, es decir, directamente después de la infección, y después de cada lavado a 24, 48 y 72 hpi con 5 embriones/punto de tiempo. Realice todos los pasos debajo del puesto de seguridad microbiológica.</li>
	<li>Prepare para cada larva infectada tubos de microcentrífuga de 1,5 mL que contengan 95 μL de 1x PBS. El volumen de las larvas es de alrededor de 5 μL.</li>
	<li>Transfiera las larvas a una placa de 6 pocillos con 4 mL de agua de pescado sin azul de metileno para realizar un lavado y eliminar las bacterias planctónicas.</li>
	<li>Coloque cada embrión en un tubo de microcentrífuga que contenga PBS, agregando la menor cantidad de líquido posible. Basta con tocar la pipeta de vidrio que contiene las larvas en la superficie del PBS para permitir que las larvas se hundan en el tubo de microcentrífuga sin añadir líquido.</li>
	<li>Triture los embriones individualmente con un mortero en el costado del tubo de microcentrífuga. Mantenga el mortero dentro del tubo. Determinar el punto final cuando no queda ningún embrión intacto.</li>
	<li>Levante el mortero y agregue 100 μL de PBS-Triton al 2% para enjuagar las bacterias residuales del mortero (la concentración final es del 1%). Vórtice y espere 10 min. No procese más de cinco embriones al mismo tiempo.</li>
	<li>Deje caer 3 veces 10 μL de lisados no diluidos en placas de agar LB para cada embrión. Realice una dilución en serie de los lisados en una placa de 96 pocillos hasta alcanzar una dilución de 10-3 utilizando una pipeta multicanal. Dejar caer 3 veces, 10 μL de dilución 10-1, 10-2 y 10-3 junto a las no diluidas en placas de agar LB e incubar las placas durante la noche a 37 °C.</li>
	<li>Cuente las colonias fluorescentes de cada dilución bajo el microscopio y calcule la UFC por embrión infectado.</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68464/68464fig1.jpg"> 
Figura 1: Cronología experimental para evaluar la virulencia y persistencia bacteriana en embriones de pez cebra. Abreviaturas: UFC = Unidades formadoras de colonias, hpi = horas después de la infección. El dibujo fue creado con BioRender.com. La cifra ha sido modificada de13. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68464/68464fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
8. Probar el tratamiento contra la infección persistente (Figura 2)
<ol>
	<li>Preparar soluciones antibióticas a 40 veces la concentración inhibitoria mínima (CMI) para la cepa de P. aeruginosa . Antes del experimento, compruebe que la concentración elegida de antibiótico no es tóxica para el embrión.</li>
	<li>Siga los pasos 7.1 y 7.2. Coloque 1 mL de agua de pescado con antibióticos en una placa de 24 pocillos y haga un control sin antibióticos.</li>
	<li>Transfiera cinco embriones de la etapa de lavado por tratamiento a la placa de 24 pocillos, agregando la menor cantidad de líquido posible.</li>
	<li>Incubar con los antibióticos durante 30 minutos a temperatura ambiente. Vuelva al paso 7.3. para cuantificar la carga bacteriana después del tratamiento.</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68464/68464fig2.jpg"> 
Figura 2: Procedimiento experimental utilizado para evaluar la eficacia de los tratamientos antibióticos en embriones infectados. Abreviaturas: ATB 30' = tratamiento antibiótico durante 30 min, UFC = unidades formadoras de colonias, hpi = horas post infección. El dibujo fue creado con BioRender.com. La cifra ha sido modificada de13. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68464/68464fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

<ol><li>Garcia-Clemente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Pseudomonas+aeruginosa+Infection+on+Patients+with+Chronic+Inflammatory+Airway+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Impact of Pseudomonas aeruginosa Infection on Patients with Chronic Inflammatory Airway Diseases.</a> J Clin Med. 9 (12), 3800(2020).</li>
<li>Serra, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+wound+infections%3A+the+role+of+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Anti-Infect%22%5BJournal%5D)">Chronic wound infections: the role of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus.</a> Expert Rev Anti-Infect. 13 (5), 605-613 (2015).</li>
<li>Tacconelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery%2C+research%2C+and+development+of+new+antibiotics%3A+the+WHO+priority+list+of+antibiotic-resistant+bacteria+and+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Discovery, research, and development of new antibiotics: the WHO priority list of antibiotic-resistant bacteria and tuberculosis.</a> Lancet Infect Dis. 18, 318-327 (2018).</li>
<li>La Rosa, R., Johansen, H. K., Molin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+Bacterial+Infections%2C+Antibiotic+Treatment+Failure%2C+and+Microbial+Adaptive+Evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Antibiotics%22%5BJournal%5D)">Persistent Bacterial Infections, Antibiotic Treatment Failure, and Microbial Adaptive Evolution.</a> Antibiotics. 11 (3), 419(2022).</li>
<li>Kember, M., Grandy, S., Raudonis, R., Cheng, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-Canonical+Host+Intracellular+Niche+Links+to+New+Antimicrobial+Resistance+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Non-Canonical Host Intracellular Niche Links to New Antimicrobial Resistance Mechanism.</a> Pathogens. 11 (2), 220(2022).</li>
<li>Lorenz, A., Pawar, V., Häussler, S., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+host-pathogen+interactions+from+state-of-the-art+animal+models+of+respiratory+Pseudomonas+aeruginosa+infections%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Insights into host-pathogen interactions from state-of-the-art animal models of respiratory Pseudomonas aeruginosa infections.</a> FEBS Lett. 590, 3941-3959 (2016).</li>
<li>Reyne, N., McCarron, A., Cmielewski, P., Parsons, D., Donnelley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+bead+or+not+to+bead%3A+A+review+of+Pseudomonas+aeruginosa+lung+infection+models+for+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">To bead or not to bead: A review of Pseudomonas aeruginosa lung infection models for cystic fibrosis.</a> Front Physiol. 14, 1104856(2023).</li>
<li>Pletzer, D., Mansour, S. C., Wuerth, K., Rahanjam, N., Hancock, R. E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Mouse+Model+for+Chronic+Infections+by+Gram-Negative+Bacteria+Enabling+the+Study+of+Anti-Infective+Efficacy+and+Host-Microbe+Interactions%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">New Mouse Model for Chronic Infections by Gram-Negative Bacteria Enabling the Study of Anti-Infective Efficacy and Host-Microbe Interactions.</a> mBio. 8, e00140-e00217 (2017).</li>
<li>Pont, S., Blanc-Potard, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+Embryo+Infection+Model+to+Investigate+Pseudomonas+aeruginosa+Interaction+With+Innate+Immunity+and+Validate+New+Therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish Embryo Infection Model to Investigate Pseudomonas aeruginosa Interaction With Innate Immunity and Validate New Therapeutics.</a> Front Cell Infect Microbiol. 11, 745851(2021).</li>
<li>Nogaret, P., El Garah, F., Blanc-Potard, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Infection+Protocol+in+Zebrafish+Embryo+to+Assess+Pseudomonas+aeruginosa+Virulence+and+Validate+Efficacy+of+a+Quorum+Sensing+Inhibitor+In+Vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">A Novel Infection Protocol in Zebrafish Embryo to Assess Pseudomonas aeruginosa Virulence and Validate Efficacy of a Quorum Sensing Inhibitor In Vivo.</a> Pathogens. 10 (4), 401(2021).</li>
<li>Phennicie, R. T., Sullivan, M. J., Singer, J. T., Yoder, J. A., Kim, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+resistance+to+Pseudomonas+aeruginosa+infection+in+zebrafish+is+mediated+by+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immunity%22%5BJournal%5D)">Specific resistance to Pseudomonas aeruginosa infection in zebrafish is mediated by the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator.</a> Infect Immunity. 78 (11), 4542-4550 (2010).</li>
<li>Kumar, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+Transcriptomics+of+Host-Pathogen+Interaction+of+Cystic+Fibrosis+Isolate+Pseudomonas+aeruginosa+PASS1+With+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Dual Transcriptomics of Host-Pathogen Interaction of Cystic Fibrosis Isolate Pseudomonas aeruginosa PASS1 With Zebrafish.</a> Front Cell Infect Microbiol. 8, 406(2018).</li>
<li>Pont, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+Pseudomonas+aeruginosa+persist+and+evade+antibiotic+treatment+in+a+wound+infection+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Intracellular Pseudomonas aeruginosa persist and evade antibiotic treatment in a wound infection model.</a> PLoS Pathogens. 21 (2), e1012922(2025).</li>
<li>Facchini, M., De Fino, I., Riva, C., Bragonzi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+Term+Chronic+Pseudomonas+aeruginosa+Airway+Infection+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice.</a> J Vis Exp. (85), e51019(2014).</li>
<li>Bianconi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+genomics+and+biological+characterization+of+sequential+Pseudomonas+aeruginosa+isolates+from+persistent+airways+infection%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genom%22%5BJournal%5D)">Comparative genomics and biological characterization of sequential Pseudomonas aeruginosa isolates from persistent airways infection.</a> BMC Genom. 16, 1105(2015).</li>
<li>Buyck, J. M., Tulkens, P. M., Van Bambeke, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacodynamic+evaluation+of+the+intracellular+activity+of+antibiotics+towards+Pseudomonas+aeruginosa+PAO1+in+a+model+of+THP-1+human+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicro+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Pharmacodynamic evaluation of the intracellular activity of antibiotics towards Pseudomonas aeruginosa PAO1 in a model of THP-1 human monocytes.</a> Antimicro Agents Chemother. 57 (5), 2310-2318 (2013).</li>
<li>Volpe, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permeability+classification+of+representative+fluoroquinolones+by+a+cell+culture+method%5BTitle%5D)+AND+%22Aaps+Pharmsci%22%5BJournal%5D)">Permeability classification of representative fluoroquinolones by a cell culture method.</a> Aaps Pharmsci. 6 (2), 1-6 (2004).</li>
<li>Pang, Z., Raudonis, R., Glick, B. R., Lin, T. J., Cheng, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+resistance+in+Pseudomonas+aeruginosa%3A+mechanisms+and+alternative+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">Antibiotic resistance in Pseudomonas aeruginosa: mechanisms and alternative therapeutic strategies.</a> Biotechnol Adv. 37 (1), 177-192 (2019).</li>
<li>Lamberti, Y., Surmann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intracellular+phase+of+extracellular+respiratory+tract+bacterial+pathogens+and+its+role+on+pathogen-host+interactions+during+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">The intracellular phase of extracellular respiratory tract bacterial pathogens and its role on pathogen-host interactions during infection.</a> Curr Opin Infect Dis. 34 (3), 197-205 (2021).</li>
</ol>

<a href="https://app.jove.com/t/6639">This corrects</a> the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/68464">10.3791/68464</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/68464">Modeling Persistent Pseudomonas aeruginosa Infection in Wounded Zebrafish Larvae</a>. The Authors&#160;section was&#160;updated.

Erratum: Modeling Persistent Pseudomonas aeruginosa Infection in Wounded Zebrafish Larvae

<table><tbody><tr><td>Metanosulfonato de etil-3-aminobenzoato</td><td>Sigma</td><td>E50521</td><td></td></tr><tr><td>Pellet de pistón</td><td>Eppendorf, Dutscher</td><td>33522</td><td></td></tr><tr><td>Sales marinas</td><td>Instant Ocean, Sistemas de acuarios&nbsp; &nbsp;</td><td>218035</td><td></td></tr><tr><td>Tritón</td><td>Euromedex</td><td>2000-B</td><td></td></tr></tbody></table>

modelado de la infección persistente por pseudomonas aeruginosa en larvas de pez cebra heridas

Modeling Persistent Pseudomonas aeruginosa Infection in Wounded Zebrafish Larvae

El embrión de pez cebra es un modelo apropiado para monitorizar una infección persistente con aislados de CF de P. aeruginosa Utilizamos el modo de inmersión de embriones lesionados para evaluar in vivo la virulencia de tres aislados de CF (A6520, B6513 y C6490)9. También evaluamos el comportamiento de un aislado de FQ tardía bien caracterizado, RP73, conocido por su colonización a largo plazo en las vías respiratorias de rat...

Modelado de la infección persistente por Pseudomonas aeruginosa en larvas de pez cebra heridas

Pseudomonas aeruginosa is a major human pathogen, particularly in chronic wound infections and chronic pulmonary infections (especially in patients with ...

modeling-persistent-pseudomonas-aeruginosa-infection-wounded

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Embriones de pez cebra transparentes han demostrado ser útiles los ejércitos de modelo para visualizar y las interacciones funcionales de estudio entre las células inmunes y los patógenos bacterianos intracelulares, tales...

La infección de embriones de pez cebra con patógenos bacterianos intracelulares

El rápido desarrollo de tamaño pequeño y la transparencia del pez cebra son grandes ventajas para el estudio del control inmunitario innato de la...

La imagen no invasiva de la candidiasis diseminada en larvas de pez cebra

Este video describe una técnica de inyección intraperitoneal, un método para administrar soluciones en la cavidad abdominal de un pez cebra adulto.

Inyección intraperitoneal: un método de administración de solución en la cavidad abdominal de un pez cebra adulto

Fuente: Luukinen, H., et al. Modelado de la tuberculosis en peces cebra adultos infectados por Mycobacterium marinum .  J. Vis. Exp. (2018).

Evaluación del papel de la inmunidad del huésped en la infección por micobacterias utilizando un modelo de pez cebra

Fuente: Flores, E., et al. Utilizando el protozoo Paramecium caudatum como vehículo para infecciones alimentarias en larvas de pez cebra. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo demuestra el método para establecer un modelo de infección intestinal bacteriana transmitida por alimentos en larvas de pez cebra, alimentándolas con paramecia infectada con E. coli fluorescente.

Modelado de la infección intestinal en larvas de pez cebra utilizando bacterias transmitidas por alimentos

Las interacciones espacio-temporales in vivo del patógeno y las defensas inmunitarias a nivel de la mucosa no se visualizan fácilmente en los huéspedes vertebrados existentes. El método presentado aquí describe una plataforma versátil para estudiar la candidiasis de la mucosa en vertebrados vivos utilizando la vejiga natatoria del pez cebra juvenil como sitio de infección.

Modelado de las mucosas Candidiasis en larvas de pez cebra por inyección de Swimbladder

Los embriones de pez cebra ópticamente transparentes se utilizan ampliamente para estudiar y visualizar en tiempo real las interacciones entre los microorganismos patógenos y las células inmunitarias innatas. La microinyección de Mycobacterium abscessus, combinada con imágenes de fluorescencia, se utiliza para examinar las características patógenas esenciales, como la formación del cordón en los embriones de pez cebra.

Descifrar e imagen Patogénesis y Cording de<em&gt; Abscessus Mycobacterium</em&gt; En embriones de pez cebra

Aquí, presentamos un protocolo de tuberculosis humana modelo en un pez cebra adulto utilizando su patógeno natural marinum de la micobacteria. Extraen ADN y ARN de los órganos internos del pez cebra infectado pueden utilizarse para revelar que el total de micobacterias cargas en los peces y la respuesta inmune del hospedador con qPCR.

Modelado de la Tuberculosis de Mycobacterium marinum infección pez cebra adulto

El presente estudio describe un modelo de embrión de pez cebra para visualización in vivo y análisis intravital de infecciones asociadas a biomateriales en el tiempo basado en microscopía de fluorescencia. Este modelo es un sistema prometedor complementando modelos animales mamíferos como los modelos de ratón para el estudio de las infecciones asociadas a biomateriales en vivo.

Un modelo de embrión de pez cebra para In Vivo visualización y análisis Intravital de Biomaterial asociados Staphylococcus aureus infección

Describimos un protocolo de inoculación retardada para generar infecciones crónicas por heridas en ratones inmunocompetentes.

Un modelo de inoculación tardía de la infección crónica por la herida de Pseudomonas aeruginosa

Este protocolo describe un modelo de infección por Aspergillus en larvas de pez cebra. Las esporas de Aspergillus se microinyectan en el cerebro posterior de las larvas, y el tratamiento químico se utiliza para inducir la inmunosupresión. La progresión de la infección se supervisa a través de una configuración de imágenes diaria para controlar el crecimiento de hongos y las respuestas inmunitarias, así como la enumeración de esporas vivas por la colonia que forma el revestimiento de la unidad.

Infección De Larvas De Pez Cebra Con Esporas De Aspergillus Para El Análisis De Las Interacciones Huésped-Patógeno

Aprende a modelar infecciones persistentes por Pseudomonas aeruginosa en larvas de pez cebra heridas. Este método in vivo reproduce la tolerancia antibiótica y facilita el cribado de compuestos terapéuticos.

Modelado de la infección persistente por Pseudomonas aeruginosa en larvas de pez cebra heridas

Explorar más videos