Name: Cuantificación tridimensional del moco intestinal mediante imágenes de tejido de montaje completo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-12T13:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 10 s
Description: Aprende a cuantificar el moco intestinal en 3D mediante microscopía multiphotón de tejidos de montaje completo en ratones. Este protocolo revela cambios estructurales y volumétricos inaccesibles con métodos 2D convencionales.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Haber, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-cell+survey+of+the+small+intestinal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A single-cell survey of the small intestinal epithelium.</a> Nature. 551 (7680), 333-339 (2017).</li>
<li>Bergstrom, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximal+colon-derived+O-glycosylated+mucus+encapsulates+and+modulates+the+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Proximal colon-derived O-glycosylated mucus encapsulates and modulates the microbiota.</a> Science. 370 (6515), 467-472 (2020).</li>
<li>Johansson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inner+of+the+two+muc2+mucin-dependent+mucus+layers+in+colon+is+devoid+of+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The inner of the two muc2 mucin-dependent mucus layers in colon is devoid of bacteria.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (39), 15064-15069 (2008).</li>
<li>Nyström, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+intercrypt+subpopulation+of+goblet+cells+is+essential+for+colonic+mucus+barrier+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">An intercrypt subpopulation of goblet cells is essential for colonic mucus barrier function.</a> Science. 372 (6539), eabb1590(2021).</li>
<li>Van Der Post, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+weakening+of+the+colonic+mucus+barrier+is+an+early+event+in+ulcerative+colitis+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Structural weakening of the colonic mucus barrier is an early event in ulcerative colitis pathogenesis.</a> Gut. 68 (12), 2142-2151 (2019).</li>
<li>Van Der Sluis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muc2-deficient+mice+spontaneously+develop+colitis%2C+indicating+that+muc2+is+critical+for+colonic+protection%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Muc2-deficient mice spontaneously develop colitis, indicating that muc2 is critical for colonic protection.</a> Gastroenterology. 131 (1), 117-129 (2006).</li>
<li>Velcich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+cancer+in+mice+genetically+deficient+in+the+mucin+muc2%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Colorectal cancer in mice genetically deficient in the mucin muc2.</a> Science. 295 (5560), 1726-1729 (2002).</li>
<li>Birchenough, G. M., Nyström, E. E., Johansson, M. E., Hansson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sentinel+goblet+cell+guards+the+colonic+crypt+by+triggering+NLRP6-dependent+Muc2+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A sentinel goblet cell guards the colonic crypt by triggering NLRP6-dependent Muc2 secretion.</a> Science. 352 (6293), 1535-1542 (2016).</li>
<li>Dolan, B., Ermund, A., Martinez-Abad, B., Johansson, M. E., Hansson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clearance+of+small+intestinal+crypts+involves+goblet+cell+mucus+secretion+by+intracellular+granule+rupture+and+enterocyte+ion+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Signal%22%5BJournal%5D)">Clearance of small intestinal crypts involves goblet cell mucus secretion by intracellular granule rupture and enterocyte ion transport.</a> Sci Signal. 15 (752), eabl5848(2022).</li>
<li>Gustafsson, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ex+vivo+method+for+studying+mucus+formation%2C+properties%2C+and+thickness+in+human+colonic+biopsies+and+mouse+small+and+large+intestinal+explants%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">An ex vivo method for studying mucus formation, properties, and thickness in human colonic biopsies and mouse small and large intestinal explants.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302 (4), G430-G438 (2012).</li>
<li>Sawaed, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotics+damage+the+colonic+mucus+barrier+in+a+microbiota-independent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Antibiotics damage the colonic mucus barrier in a microbiota-independent manner.</a> Sci Adv. 10 (37), eadp4119(2024).</li>
<li>Bergstrom, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Core+1-and+3-derived+o-glycans+collectively+maintain+the+colonic+mucus+barrier+and+protect+against+spontaneous+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Core 1-and 3-derived o-glycans collectively maintain the colonic mucus barrier and protect against spontaneous colitis in mice.</a> Mucosal Immunol. 10 (1), 91-103 (2017).</li>
<li>Cortez, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrovirus+infects+actively+secreting+goblet+cells+and+alters+the+gut+mucus+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Astrovirus infects actively secreting goblet cells and alters the gut mucus barrier.</a> Nat Commun. 11 (1), 2097(2020).</li>
<li>Knoop, K. A., Mcdonald, K. G., Mccrate, S., Mcdole, J. R., Newberry, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+sensing+by+goblet+cells+controls+immune+surveillance+of+luminal+antigens+in+the+colon%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microbial sensing by goblet cells controls immune surveillance of luminal antigens in the colon.</a> Mucosal Immunol. 8 (1), 198-210 (2015).</li>
<li>Nikitas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcytosis+of+Listeria+monocytogenes+across+the+intestinal+barrier+upon+specific+targeting+of+goblet+cell+accessible+E-cadherin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Transcytosis of Listeria monocytogenes across the intestinal barrier upon specific targeting of goblet cell accessible E-cadherin.</a> J Exp Med. 208 (11), 2263-2277 (2011).</li>
<li>Tsai, Y. H., Disson, O., Bierne, H., Lecuit, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murinization+of+internalin+extends+its+receptor+repertoire%2C+altering+Listeria+monocytogenes+cell+tropism+and+host+responses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Murinization of internalin extends its receptor repertoire, altering Listeria monocytogenes cell tropism and host responses.</a> PLoS Pathog. 9 (5), e1003381(2013).</li>
<li>Birchenough, G. M., Johansson, M. E., Gustafsson, J. K., Bergstrom, J. H., Hansson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+developments+in+goblet+cell+mucus+secretion+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">New developments in goblet cell mucus secretion and function.</a> Mucosal Immunol. 8 (4), 712-719 (2015).</li>
<li>Maheras, K. J., Gow, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+anesthesia+time+using+2%2C2%2C2-tribromoethanol-chloral+hydrate+with+low+impact+on+mouse+psychoacoustics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Increased anesthesia time using 2,2,2-tribromoethanol-chloral hydrate with low impact on mouse psychoacoustics.</a> J Neurosci Methods. 219 (1), 61-69 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2,2,2-tribromoetanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td></td></tr><tr><td>2-metil-2-butanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>240486</td><td></td></tr><tr><td>6 cm de plato y nbsp;</td><td>Alpha Plus</td><td>16021-1</td><td></td></tr><tr><td>Agarose&nbsp;</td><td>Hispanagar</td><td>A02599</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>BioShop</td><td>ALB001</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de carbamoilcolina & ge; 98% (titulación), cristalino</td><td>SIGMA</td><td>SI-C4382-1G</td><td></td></tr><tr><td>Alambre de cobre (nuevo)</td><td>CABLE DE TECNOLOGÍA SUPERIOR Y INDUSTRIA DEL CABLE</td><td>IW00125</td><td>Alambre de cobre sin capa aislante</td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>Shineteh</td><td>ST-M110</td><td></td></tr><tr><td>Gasa, estéril</td><td>GMTH</td><td>Mayo-40</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8&nbsp;</td><td>GraphPad Software</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla térmica</td><td>CONFORT</td><td>SY-666</td><td></td></tr><tr><td>IMARIS 10.0.0</td><td>INSTRUMENTOS OXFORD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehido</td><td>BIOVOVAS</td><td>BL0415-1000</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GENESTAR</td><td>BL0180-1000</td><td></td></tr><tr><td>Sondas de Marcado de Faloidinas</td><td>Invitrogen</td><td>A12379</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras</td><td>Shineteh</td><td>02-1250.18</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Merck</td><td>1.08603.1000</td><td></td></tr><tr><td>Conjugados de la Aglutinina de Germen de Trigo (WGA)</td><td>Biotium</td><td>29027</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss 7MP con un objetivo de inmersión en agua W Plan-Apochromat 20 x/1.0 DIC III (NA 1.0), láser Spectra-Physics Mai Tai HP ti zafiro de femtosegundos (sin módulo DeepSee) con detectores BP500 nm-550 nm y BP565 nm-610 nm, y longitud de onda láser de 750 nm</td><td></td><td></td><td>plataforma de imagen utilizada para adquirir pilas 3D con una lente objetivo de alto NA para imágenes de tejido profundo; una fuente de excitación para microscopía multifotona ajustada a una longitud de onda de 750 nm</td></tr></tbody></table>

cuantificación tridimensional del moco intestinal mediante imágenes de tejido de montaje completo

Three-dimensional Quantification of Intestinal Mucus Using Whole-mount Tissue Imaging

En este método, cuantificamos el volumen de moco intestinal a partir de imágenes apiladas de tejidos de montaje completo adquiridos mediante microscopía multifotónica. Los tejidos intestinales se tiñeron con faloidina fluorescente y aglutinina de germen de trigo (WGA) para visualizar la F-actina celular y el moco, respectivamente15,16. Tanto en los tejidos ileales como en los colónicos tratados con PBS, el moco WGA+ se detectó principalmente dentro de ...

Cuantificación tridimensional del moco intestinal mediante imágenes de tejido de montaje completo

Mucus plays a critical role in maintaining intestinal homeostasis by facilitating digestion, forming a barrier against microbes, and regulating immune ...

three-dimensional-quantification-intestinal-mucus-using-whole-mount

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

La tecnología de imagen mejorada está permitiendo la obtención de imágenes tridimensionales de los órganos durante el desarrollo. Aquí describimos un sistema de cultivo de órganos completo que permite obtener imágenes en vivo de las vellosidades en desarrollo en el intestino fetal del ratón.

Sistema de Cultura ratón fetal Whole Intestino para Ex Vivo Manipulación de vías de señalización y tridimensional de imágenes en vivo del desarrollo de vellosidades

La identificación exacta y la ubicación de las células epiteliales a lo largo del revestimiento de la mucosa intestinal son esenciales para definir diferentes linajes celulares. de formación de imágenes adecuado de los tejidos intestinales es crucial para la identificación de patrones de expresión de proteínas con la máxima resolución. Este estudio tiene como objetivo delinear los métodos y condiciones óptimas para el procesamiento de tejidos intestinales de ratón.

Mejora Técnica Swiss-laminación para la preparación del tejido intestinal para inmunohistoquímica y análisis de inmunofluorescencia

Sondas específicas de objetivo representan una herramienta innovadora para el análisis de los mecanismos moleculares, como la expresión de proteínas en diversos tipos de enfermedad (p. ej., inflamación, infección y tumorigenesis). En este estudio, describimos una evaluación tomográfica tridimensional cuantitativa de la infiltración de macrófagos intestinales en un modelo murino de colitis con F4/80-específica mediada por fluorescencia tomografía.

Tomografía mediada por fluorescencia para la detección y cuantificación de la inflamación Intestinal murina relacionadas con macrófagos

Describimos un método para visualizar los IEL con la etiqueta GFP utilizando imágenes intravitales del intestino delgado murina mediante microscopía confocal de disco giratorio invertido. Esta técnica permite el seguimiento de células vivas dentro de la mucosa hasta 4 h y se puede utilizar para investigar una variedad de interacciones inmunoepiteliales intestinales.

Imágenes intravitales de linfocitos intraepiteliales en el intestino pequeño murino

Aprovechando la microscopía intravital, el método presentado aquí permite la visualización en tiempo real del desprendimiento de células epiteliales intestinales en animales vivos. Por lo tanto, la mucosa intestinal teñida tópicamente (acriflavina y rhodamineB-dextran) de ratones anestesiados se compara hasta una sola célula mediante microscopía confocal.

Un enfoque basado en microscopía intravital para evaluar la permeabilidad intestinal y el rendimiento del desprendimiento de células epiteliales

Este protocolo simplificado detalla un flujo de trabajo para detectar e obtener imágenes de bacterias en muestras de tejido complejo, desde la fijación del tejido hasta la tinción de microbios con hibridación fluorescente in situ .

Visualización de las interacciones entre la microbiota intestinal y el huésped a través de la hibridación fluorescente in situ , la tinción de lectina y la obtención de imágenes

Para estudiar cómo el intestino delgado maneja partículas de diferentes tamaños, hemos modificado un método in vivo establecido para determinar el tránsito del intestino delgado.

Estudio de la mecanodetección murina del intestino delgado de partículas luminales

Aquí describimos la construcción de un sistema modelo básico tridimensional (3D) de líneas celulares intestinales y un protocolo de inclusión de parafina para la evaluación microscópica óptica de equivalentes intestinales fijos. La tinción de proteínas seleccionadas permite el análisis de múltiples parámetros visuales de un solo experimento para su uso potencial en estudios preclínicos de detección de fármacos.

Sistema Modelo Intestinal Tridimensional Básico (3D) con un Componente Inmune

Aquí, describimos un procedimiento que permite la detección de bacterias patógenas en todo el órgano durante la infección y la cuantificación de las actividades de los reporteros fluorescentes.

Tomografía tridimensional de órgano entero de alta resolución de infecciones microbianas

En este artículo se describe un protocolo de inmunofluorescencia multiplex optimizado para caracterizar la arquitectura tridimensional de las metástasis peritoneales.

Imágenes tridimensionales de tejido tumoral mediante el enfoque de blanqueamiento iterativo que extiende la multiplexidad

Aprende a cuantificar el moco intestinal en 3D mediante microscopía multiphotón de tejidos de montaje completo en ratones. Este protocolo revela cambios estructurales y volumétricos inaccesibles con métodos 2D convencionales.

Cuantificación tridimensional del moco intestinal mediante imágenes de tejido de montaje completo

Explorar más videos